瘦素基因真核表达载体的构建及在人胎盘源间充质干细胞中的转染与表达

发布时间：2021-03-19 12:47

　　逐步加快的社会生活节奏，越来越多的环境因素、社会心理因素导致了恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势，恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势，目前颌面部肿瘤术后所造成的组织缺损通常采取皮瓣移植的方法加以整复。切除后通过化学药物治疗或者是放射治疗，这样会引起皮瓣继发性放射损害，迁延难愈，由此所导致的创区难愈及皮瓣坏死是一种典型的“放创复合伤”，在目前较难治疗。瘦素（Leptin）作为一种创伤修复细胞因子，对于促进创伤愈合，发挥着不可替代的作用。人胎盘源间充质干细胞（HPMSCs）可以在一定条件下分化成为多种组织细胞，它也能够促进创伤组织的修复。本实验拟将leptin基因转入HPMSCs中，鉴定leptin基因在HPMSCs中的表达，为后续的转基因干细胞治疗放创复合伤奠定基础。本实验在无菌条件下剥除胎盘羊膜,然后取羊膜面胎盘组织,用PBS冲洗干净后用眼科剪剪成碎片,用胶原酶II消化，并用人淋巴细胞分离液除去部分杂细胞，得到的单个核细胞传代培养至第3代；分别根据瘦素基因的序列，并结合pIRES2-EGFP载体和pMD18-T-simple上的多克隆位点，在基因两端设计酶切位点，在瘦素基因5＇端引入NheI酶... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

leptin基因片段PCR产物的凝胶电泳鉴定

11图2.2 leptin基因测序图谱2） 重组质粒酶切鉴定重组质粒pIRES2-EGFP-LEP构建后，以空载体作为对照组，经琼脂糖凝胶电泳分别可见大小为5.7kb、5.3kb左右的两条带（图2.3）；前者为重组质粒pIRES2-EGFP-LEP，后者为空载体pIRES2-EGFP，而双酶切后凝胶电泳检测，则可

组质粒pIRES2-EGFP-LEP构建成功。M：1kb DNA Ladder Marker；1：重组质粒pIRES2-EGFP-LEP；2：pIRES2-EGFP图2.3 重组质粒的凝胶电泳鉴定M：DNA Marker Ⅲ； 1：酶切产物图 2.4 重组质粒 pIRES2-EGFP-LEP 的酶切鉴定3） 真核表达载体示意图（图2.5）

【参考文献】：
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本文编号：3089592