机械激活性离子通道压电蛋白Piezo1通过Notch信号通路介导牙周膜干细胞成骨分化作用机制研究

发布时间：2021-04-04 12:43

　　目的探究机械激活性离子通道压电蛋白Piezo1通过Notch信号通路介导人牙周膜干细胞（h PDLSC）成骨分化作用机制。方法选取自2016年1月1日—2018年1月1日就诊于北京儿童医院正畸科的8～14岁儿童因阻生而拔出的年轻恒牙的牙周膜组织为细胞来源,采用酶消化法对hPDLSC进行提取。采用免疫组织化学染色法检测角蛋白、波形蛋白的表达和流式细胞术对hPDLSC的标志物CD146和STRO-1进行鉴定。构建和筛选siRNA-Piezo1基因干扰载体和Piezo1基因过表达质粒。应用Flexcell 4000T机械牵张应力仪器构建体外牵张力学hPDLSC细胞模型。实验分成5组:siRNA干扰组、过表达组、空白对照组、牵张应力组和阴性对照组。荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测Piezo1、Notch1和成骨基因碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关基因2（Runx2）、骨钙素（OCN）和骨涎蛋白（BSP）的表达。Western blot检测成骨标志蛋白ALP和Runx2的表达。Fluo-3 AM探针检测细胞内钙离子含量。结果 h PDLSC波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。流式细胞仪... 

【文章来源】：华西口腔医学杂志. 2020,38(06)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

h PDLSC的鉴定免疫组织化学染色

si RNA干扰组、过表达组、空白对照组、牵张应力组和阴性对照组Piezo1 m RNA的表达水平差异有统计学意义（F=9.573,P<0.05）。过表达组、空白对照组Piezo1 m RNA表达水平明显高于si RNA干扰组，差异有统计学意义（q=3.893,P<0.05;q=2.113,P<0.05）。牵张应力组Piezo1 m RNA表达水平明显高于空白对照组，差异有统计学意义（q=2.006,P<0.05），但是与阴性对照组比较，差异无统计学意义（q=0.208,P>0.05）（图4A）。si RNA干扰组、过表达组、空白对照组、牵张应力组和阴性对照组Notch1 m RNA的表达水平差异有统计学意义（F=11.003,P<0.05）。过表达组、空白对照组Notch1 m RNA水平明显高于si RNA干扰组，差异具有统计学意义（q=2.991,P<0.05;q=2.463,P<0.05）。牵张应力组Notch1 m RNA表达水平明显高于空白对照组，差异有统计学意义（q=2.331,P<0.05），但是与阴性对照组比较，差异无统计学意义（q=0.188,P>0.05）（图4B）。成骨基因ALP、Runx2、OCN和BSP的表达也有同样的趋势（图4C～F）。2.5 Western blot检测成骨标志蛋白ALP和Runx2的表达

Western blot检测ALP和Runx2的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]超表达Notch胞内结构域对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响[J]. 邱申彩,龙晏,陈晓燕,舍玉秀,吴佩玲.  中华口腔医学杂志. 2019 (05)
[2]口腔牙齿矫正中不同材料矫正器的应用效果差异分析[J]. 申岩岩.  当代医学. 2018(05)
[3]口腔正畸治疗牙周病致前牙移位的效果分析[J]. 吴晓光.  中西医结合心血管病电子杂志. 2017(31)
[4]力与炎症因子对牙周膜细胞破骨调控因子表达的影响[J]. 张华菁,李盛楠,徐晓南,张丁.  中国医学科学院学报. 2017(05)
[5]牙齿矫正器底座金属粉末精密注塑模具设计[J]. 张维合.  中国塑料. 2017(06)
[6]口腔正畸治疗中微型种植体支抗的稳定和安全性[J]. 李薇,于世德,文静,洪席超,李燕茹.  全科口腔医学电子杂志. 2017(16)
[7]淫羊藿苷对成骨细胞成骨分化的影响及Wnt/-catenin信号系统的关系研究[J]. 涂艳,熊莉娜,柳湘洁,雷超,李凝旭,张瑞芸.  中国中医急症. 2017(03)
[8]不同浓度的抗菌肽RISE-AP12对体外培养成骨细胞生物活性的影响[J]. 谢丽敏,刘丹丹,宗菲,杨德圣.  口腔医学. 2017(02)
[9]Piezo1蛋白经MAPK/ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制研究[J]. 李晓飞,张钊,王天宝,王兰凤,张海宁.  中华骨科杂志. 2016 (12)
[10]人牙周膜干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究[J]. 甄蕾,刘宏伟.  华西口腔医学杂志. 2009(01)



本文编号：3118054