流体剪切力对SD大鼠髁突与胫骨软骨下骨成骨细胞作用的比较研究

发布时间：2017-04-17 09:03

  本文关键词：流体剪切力对SD大鼠髁突与胫骨软骨下骨成骨细胞作用的比较研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]比较研究流体剪切力作用下颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨来源成骨细胞的增殖与成骨能力。[方法]1、分别取SD大鼠乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨组织、膝关节胫骨软骨下骨组织进行成骨细胞的培养,两种不同来源成骨细胞均采用改良Ⅰ型胶原酶消化法进行原代培养、“差速贴壁法”进行纯化及传代培养,并在倒置显微镜下连续观察二者的生长状况、形态学和生物学特性；2、通过HE染色、ALP染色和钙结节茜素红S染色,鉴定两种不同来源的第四代成骨细胞；3、对鉴定后的第四代成骨细胞施加1h、12dynes/cm2的流体剪切力,之后进行细胞计数、CCK-8吸光度值及流式细胞周期的测定来比较两种不同来源成骨细胞的增殖能力；4、加力结束后,通过Real time PCR测OPGmRNA表达量,比较两种不同来源成骨细胞的成骨能力。[结果]1、两种不同组织来源细胞培养形态无明显差异,培养约24h后即可贴壁、伸展,贴壁时细胞体积均较小,呈星形、三角形及短梭形,胞核不明显,随着细胞生长分化,细胞表面有突触并相互之间连结,彼此间融合后向多层生长。传代生长至第四代时,细胞胞体增大,形态以多角形、长梭形为主,胞核明显增大,同时细胞外基质分泌增多,并包裹细胞,逐渐形成细胞团块,透光性降低,最终形成钙化结节,符合成骨细胞的生长特性；2、两种不同组织来源细胞经HE染色、ALP染色、钙结节茜素红S染色均呈现强阳性反应,鉴定全为成骨细胞；3、细胞计数显示,加力后颞下颌关节来源的成骨细胞数量显著低于膝关节来源的成骨细胞数量,差异有统计学意义(p0.05);CCK-8结果显示,加力后颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细在接种后第1-2d数目较少,为细胞的潜伏期,第3-7d生长曲线基本为线性曲线,表明细胞进入快速增殖期,第8d达到峰值,此后增殖减慢,进入平台期及衰减期。膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞在接种后第1d数目较少,为细胞的潜伏期,第2-7d生长曲线基本为线性曲线,表明细胞逐渐进入快速增殖期,第8d达到峰值,此后增殖逐渐减慢,进入平台期及衰亡期；流式细胞增殖周期结果显示,颞下颌关节来源的成骨细胞G0/G1期比例为58.662.85%,膝关节来源的成骨细胞G0/G1期比例为49.10±4.46%,差异有统计学意义(p0.05)；颞下颌关节来源的成骨细胞G2/S/M期比例为33.10±2.35%,膝关节来源的成骨细胞G2/S/M期比例为42.99±3.24%,差异有统计学意义(p0.05)；4、加力前同一时间,颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞OPGmRNA的表达量较膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞低,差异有统计学意义(p0.05)；加力后同一时间,颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞OPGmRNA的表达量较膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞低,差异有统计学意义(p0.05)；OPGmRNA表达量,无论是颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞还是膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞,加力后均比加力前增高,差异有统计学意义(p0.05)。[结论]1、来源于SD大鼠乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨、膝关节胫骨软骨下骨的原代细胞,经体外传代培养后均可得到均一性较好、具有典型成骨细胞形态特征的成骨细胞,经鉴定均为成骨细胞；2、本实验加力后细胞计数、CCK-8吸光度法及流式细胞周期结果显示：颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞增殖能力低于膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞；3、本实验加力前后OPGmRNA定量检测结果提示,颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞OPGmRNA的表达较膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞弱；4、一定的流体剪切力可以促进颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞和膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞OPGmRNA的表达。
【关键词】：流体剪切力 成骨细胞 髁突 胫骨 软骨下骨
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R782
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 引言11-14
• 第一部分 SD大鼠颞下颌关节髁突软骨下骨及膝关节胫骨软骨下骨成骨细胞的培养与鉴定14-28
• 1 材料15-16
• 2 方法16-18
• 3 两种不同组织来源成骨细胞的生物学特性分析与鉴定18-24
• 4 讨论24-27
• 5 结论27-28
• 第二部分 流体剪切力对SD大鼠髁突和胫骨软骨下骨成骨细胞增殖及成骨能力的比较28-46
• 1 材料28-30
• 2 方法30-34
• 3 数据统计分析34-35
• 4 实验结果35-40
• 5 讨论40-45
• 6 结论45-46
• 全文总结46-47
• 问题及展望47-48
• 参考文献48-51
• 综述51-62
• 参考文献59-62
• 攻读硕士期间发表的文章62-63
• 致谢63

【参考文献】

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1 唐林;林珠;李永明;王华;;不同大小机械牵张力对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶的影响[J];解放军医学杂志;2006年06期

2 唐林;邵s

本文编号：312859