不同纯钛表面形貌对神经细胞生物学行为影响的研究

发布时间：2017-04-18 17:13

  本文关键词：不同纯钛表面形貌对神经细胞生物学行为影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:目前,种植义齿因其具有良好的固位作用、避免邻牙的损伤、美观性等优点被广泛应用于牙列缺损和牙列缺失的临床修复治疗。然而与天然牙相比,种植体周围没有牙周膜、且缺乏牙周本体感受器,理论上缺乏与天然牙相似的感知能力,然而一些研究发现种植义齿患者有一定的感知觉,20世纪90年代“骨感知”理论被提出,它被认为是在缺少牙周本体感受器的情况下机体特殊的感知功能。然而,由于这种感知能力的阈值高,使得患者较难意识到过大的咬合力,长期以往,将会造成种植体周围骨质的吸收、颞下颌关节病甚至种植体的折断,最终导致种植失败。因此研究种植体植入后周围神经的再生具有重要临床意义。目的:本实验通过机械加工法(M)、喷砂酸蚀法(S)、电解蚀刻法(E)三种不同的方法制备纯钛试件,探讨得到的三种不同纯钛表面形貌对神经细胞生物学行为的影响,为研究促进种植体周围神经再生提供客观依据。方法:通过机械加工法(M)、喷砂酸蚀法(S)、电解蚀刻法(E)制备三种不同纯钛表面。使用扫描电子显微镜(SEM)观察不同表面微形貌特点。分别将RSC96细胞与各表面共培养,免疫荧光染色法检测细胞粘附情况,MTT法检测其增殖情况,Real-time PCR检测其脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)基因表达水平;提取大鼠背根神经元(DRGns),尼氏染色鉴定后,将其与试件共培养,扫描电镜检测其粘附情况。采用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析。结果:1、在扫描电子显微镜下,M、S、E三种表面的微形貌差异显著,M组表面缺乏明显的空间立体结构,表现为平行的条纹沟壑;S组表面存在大量的凹陷、窝洞及裂隙,孔洞直径约400nm-5um不等,形状不规则,大小及深浅不一,有的孔互联,边缘较锐利,有残余喷砂颗粒存在;E组表面呈现为均匀的浅凹碗状微米孔,直径20-50um、深度5-12um,在微米孔内布满了20-30nm纳米突起。2、免疫荧光染色及SEM显示,M、S、E三种表面上RSC96细胞均能粘附生长。M组,细胞数目少,多呈圆形,少数呈梭形,有较短突起;S组,细胞数多于M组,呈圆形的细胞较少,呈梭形的较多;E组,细胞数目最多,几乎全部呈长梭形粘附于表面,细胞伸展更充分,伪足更长。3、MTT检测表明,在RSC96细胞增殖的第1天,三组吸光度均值大小为E组S组M组,E组和M组之间、S组和M组之间具有统计学差异,E组和S组之间无统计学差异;在第3天和第5天,三组之间的吸光度值均值大小为E组S组M组,但各组之间缺乏统计学意义。4、Real-time PCR研究分析,在纯钛试件上培养RSC96细胞,第4天检测到BDNF基因表达的相对量为E组S组M组,各组之均没有统计学差异;第7天BDNF基因表达的相对量为E组S组M组,E组和M组之间、E组和S组之间具有统计学差异,S组和M组之间无统计学差异;第4天检测到NGF基因表达的相对量为E组S组M组,E组和M组之间有统计意义,S组和M组之间、E组和S组之间均无统计意义;第7天NGF基因表达的相对量为E组S组M组,E组和M组之间有显著性差异、S组和M组之间具有统计学差异,E组和S组之间无统计学差异。5、成功提取、鉴定大鼠背根神经元,将其与纯钛试件共培养实验显示,背根神经元在各组纯钛表面上均能够粘附、存活、生长,M组表面上神经元胞体呈椭圆形,有的伸出极短的伪足,未见明显的神经突起;S组表面上神经元胞体呈扁平状,位于不规则的凹陷或裂隙中,较M组伸出较长伪足,且可见较明显的短神经突起抓住孔壁;E组的神经元胞体呈多边形,饱满,位于碗型的孔洞中,伸出很长很明显的神经突起,跨越一个或者多个孔并牢牢抓住孔壁,可见大量细胞外基质,细胞之间的联系很紧密。结论:1、电解蚀刻技术可制得具有直径20-50um、深度5-12um的较均匀微米级孔,内布满20-30nm纳米突起的粗糙纯钛表面。2、电解蚀刻纯钛表面能够促进大鼠神经膜细胞系RSC96细胞早期粘附、伸展;早期增殖;神经营养因子基因的表达。3、在机械加工纯钛表面、喷砂酸蚀纯钛表面、电解蚀刻纯钛表面上,大鼠背根神经元DRGns均能够粘附、存活;且该神经元在电解蚀刻表面上粘附、伸展更充分,细胞之间联系更加紧密。
【关键词】：纯钛表面形貌 电解蚀刻 RSC96细胞 大鼠背根神经元 神经营养因子基因表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R783.6
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 英文缩略词表14-15
• 第1章 前言15-21
• 1.1 骨感知的研究背景及进展15-16
• 1.2 周围神经再生的机制16-17
• 1.2.1 周围神经再生过程的研究16
• 1.2.2 种植体植入后种植体周围神经再生16-17
• 1.3 种植体表面对周围神经再生的影响17-19
• 1.4 种植体表面与周围神经再生的机制19-21
• 第2章 材料和方法21-34
• 2.1 实验材料21-23
• 2.1.1 实验设备、材料、试剂21-23
• 2.1.2 实验动物、细胞系23
• 2.2 实验方法23-34
• 2.2.1 纯钛试件的制备23-24
• 2.2.2 SEM观察三种纯钛试件的表面形貌特点24
• 2.2.3 大鼠神经膜细胞系RSC96的复苏和培养24-25
• 2.2.4 免疫荧光及SEM观察三种纯钛试件表面RSC96细胞的粘附25-26
• 2.2.4.1 免疫荧光观察三种纯钛试件表面RSC96细胞的粘附25-26
• 2.2.4.2 SEM观察三种纯钛试件表面RSC96细胞的形态26
• 2.2.5 MTT法检测三种纯钛试件表面RSC96细胞的增殖26-27
• 2.2.6 Real-time PCR检测不同纯钛试件表面RSC96细胞的神经营养因子的基因表达相对量27-31
• 2.2.7 背根神经元的提取、鉴定、培养31-33
• 2.2.8 背根神经元在不同纯钛试件共培养的存活、粘附的扫描电镜观察33
• 2.2.9 统计学处理33-34
• 第3章 结果34-49
• 3.1 扫描电镜下三种纯钛试件的表面形貌的特点34-38
• 3.1.1 M组表面形貌特点34-35
• 3.1.2 S组表面形貌特点35-36
• 3.1.3 E组表面形貌特点36-38
• 3.2 免疫荧光及SEM观察三种纯钛试件表面RSC96细胞的粘附、伸展38-41
• 3.2.1 FITC标记鬼笔环肽染色和DAPI染色38-39
• 3.2.2 SEM观察39-41
• 3.3 MTT法检测不同纯钛试件表面RSC96细胞的增殖41-42
• 3.4 Real-time PCR检测不同纯钛试件表面RSC96细胞的神经营养因子的基因表达相对量42-44
• 3.5 背根神经元的鉴定44-45
• 3.6 SEM观察不同纯钛试件表面背根神经元的粘附45-49
• 第4章 讨论49-53
• 4.1 纯钛表面与种植体周围神经再生49-52
• 4.2 种植体周围神经再生及骨感知的展望52-53
• 第5章 结论53-54
• 参考文献54-61
• 导师简介61-62
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果62-63
• 致谢63-64

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周洁,陈必胜,陶长仲,姜晓钟,刘渊;钛-75合金与纯钛犬股骨内长期种植后的组织学比较研究[J];口腔医学纵横;2002年02期

2 陈钢,姚月玲,李斌,孙延,黎永钧;纳米非晶金刚石薄膜对纯钛腐蚀性能的影响[J];中国美容医学;2005年01期

3 董滢;尹路;;氟化物对纯钛及其合金耐腐蚀性影响[J];山西医药杂志;2007年02期

4 王晓波;高勃;姚月玲;杨海鸥;;纯钛激光立体成形件结构与力学性能研究[J];实用口腔医学杂志;2007年04期

5 田芝娟;苏剑生;;氟化物对纯钛及其合金性能的影响[J];中华临床医师杂志(电子版);2007年06期

6 闫澍;张玉梅;赵永庆;;热处理温度对牙科铸造纯钛拉伸性能的影响[J];实用口腔医学杂志;2008年01期

7 尹路;郭天文;;纯钛及钛合金的表面修饰[J];口腔颌面修复学杂志;2008年04期

8 闫海根;李天侠;苗一鸣;任丽萍;;注氮后纯钛在不同浓度含氟溶液中的腐蚀性研究[J];临床口腔医学杂志;2009年08期

9 陈晓星;;骨与钽、铝或商业纯钛间界面定性的研究[J];国外医学.生物医学工程分册;1991年01期

10 牛君,赵春诚,赵玉珍,崔荣智;纯钛铸造整体支架50例分析[J];现代口腔医学杂志;2002年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 黄承敏;巢永烈;;等离子浸没注入纯钛表面改性的基础研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

2 闫澍;张玉梅;施生根;牛忠英;卢怡;张艳茹;;两种退火方式对牙科铸造纯钛力学性能影响的研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

3 张辉跃;刘福祥;;微弧氧化技术用于纯钛表面改性的研究[A];第四届全国口腔种植学术会议论文集[C];2005年

4 岳虹池;;氮离子注入对纯钛表面性能影响的研究[A];第七次全国口腔修复工艺学学术交流会论文汇编[C];2011年

5 张建中;;纯钛铸造时铸造温度与流铸率[A];中华口腔医学会第三次全国口腔修复学术会议论文集[C];1997年

6 宋明奎;;纯钛铸造缩孔的原因及解决方法[A];第七次全国口腔修复工艺学学术交流会论文汇编[C];2011年

7 吴玉禄;辛海涛;张春宝;汤忠斌;;激光焊接铸造纯钛焊缝薄膜材料的力学性能研究[A];第七次全国口腔修复工艺学学术交流会论文汇编[C];2011年

8 闫澍;张玉梅;施生根;牛忠英;崔三哲;卢怡;;两种退火方式对牙科铸造纯钛力学性能影响的研究[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年

9 袁继维;刘义敏;;高纯钛结晶行为研究[A];2008年全国冶金物理化学学术会议专辑（上册）[C];2008年

10 李巍;马宝军;孙小勇;刘宏伟;史文;;电子背散射衍射技术及其在纯钛研究中的应用[A];中国有色金属学会第十四届材料科学与合金加工学术年会论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前6条

1 记者 陈朝霞 余姚记者站 张伟 谢敏军;余姚产出中国第一炉超高纯钛[N];宁波日报;2014年

2 艾班;浙江产出中国首炉超高纯钛[N];中国化工报;2014年

3 付强邋本报记者 朱海;“纯钛”镜架实为钛合金[N];中国消费者报;2008年

4 张春宝;纯钛义齿好处多[N];健康报;2006年

5 ;制造高纯钛的新技术[N];中国有色金属报;2003年

6 晓斌;纯钛超精密镜面加工技术问世[N];中国有色金属报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 尹路;渗氮类金刚石膜应用于齿科纯钛的实验研究[D];第四军医大学;2008年

2 黄承敏;等离子浸没注入和多弧离子镀对纯钛及钛合金表面改性的基础研究[D];四川大学;2004年

3 张丽君;激光快速成形纯钛的烤瓷性能研究[D];第四军医大学;2009年

4 朱娟芳;激光快速成形技术制作纯钛植入材料的实验研究[D];第四军医大学;2007年

5 郭泽鸿;激光—微弧氧化处理对纯钛表面生物活性影响的研究[D];南方医科大学;2013年

6 聂蓉蓉;微弧氧化—水热处理法在纯钛表面制备生物陶瓷涂层及其细胞相容性的实验研究[D];四川大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 蔡阳;纯钛及钛合金的强流脉冲电子束表面改性研究[D];上海工程技术大学;2015年

2 王道强;溶胶-凝胶法制备SiO_2涂层对纯钛耐腐蚀性能的影响[D];河北联合大学;2014年

3 任晓娟;纯钛金属全冠微渗漏及密合度的研究[D];河北联合大学;2014年

4 王楠;有机硅季铵盐浸泡纯钛后对白色念珠菌生长的抑制作用[D];河北医科大学;2015年

5 张立娜;纯钛烤瓷基底冠打磨方向对金瓷结合强度的影响[D];河北医科大学;2015年

6 李小孟;电子束冷床炉熔炼纯钛铸锭的工艺研究[D];西安建筑科技大学;2015年

7 刘德同;高压扭转处理超细晶纯钛微观组织演变及热稳定性研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

8 刘勇达;电流辅助TA2纯钛微塑性变形行为研究[D];哈尔滨工业大学;2015年

9 马稔秋;瑞士诺丁纯钛桩即刻修复后牙牙体大部分缺损的临床观察[D];大连医科大学;2015年

10 贾晓瑞;超细晶纯钛材料表面微弧氧化处理及其生物安全性研究[D];第四军医大学;2015年

  本文关键词：不同纯钛表面形貌对神经细胞生物学行为影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：315361