钛种植体表面固定成骨细胞特异性识别多肽的实验研究

发布时间：2017-04-18 14:02

  本文关键词：钛种植体表面固定成骨细胞特异性识别多肽的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在口腔种植的临床应用中,由于钛基材固有的生物惰性,使其植入体内后所需愈合时间较长,特别是在骨质、骨量不良部位的骨结合效应则更难以预期。为解决上述难题,对钛基材表面进行改性以获得生物活性更佳的种植体表面,缩短愈合时间并提高愈合质量,是当前该领域的研究热点。本研究旨在通过化学方法,将人成骨细胞特异性识别多肽通过共价键合将其固定在钛基材表面,并对其进行体外细胞学评价,为钛种植体表面的生物化修饰提供新的思路和前期实验基础。具体内容如下:第一部分:人成骨细胞特异性识别多肽的固定首先使用3-氨丙基膦酸(APP)对钛基材进行表面处理,膦酸基团与TiO2形成共价键合,使钛基材表面获得游离氨基;再利用生物素-亲和素系统,经碳二亚胺活化生物素上的羧基形成酰胺键,从而将生物素-亲和素链接在基材表面,最后再通过生物素-亲和素之间的特异性结合,从而在钛基材表面成功固定生物素化多肽分子。采用环境扫描电镜、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、X射线光电子能谱(XPS)以及免疫荧光对钛基材进行表征,检测其各项性质。结果表明:经过APP处理后的钛片相比较于光滑钛片,表面呈现均匀分布的大小、深浅不一的孔状结构,高放大倍数下显示该结构为许多孔隙组成,孔径大小不等,其底部及周壁有微孔,孔径约1-2μm。同时结合FTIR、XPS检测表面基团成分以及元素比例的变化,可以证实APP成功构建了单分子自组装层,表面含有游离氨基。最后通过免疫荧光证实特异性识别多肽成功固定在钛基材表面。第二部分:特异性识别多肽表面对人成骨细胞的生物学评价。将人成骨细胞接种于光滑钛片以及多肽修饰的钛片表面进行体外培养,利用激光共聚焦显微镜观察成骨细胞在不同材料表面的粘附形态,并进行MTT、碱性磷酸酶(ALP)检测。将定量数据整理后进行统计学分析,分析材料对细胞的粘附、成骨等生物学功能的作用。结果表明:与光滑钛片比较,多肽修饰钛片表面人成骨细胞分布更加密集,形态呈多边形,铺展更为充分,有较多的细胞伪足。同时MTT、ALP检测显示成骨细胞在目的钛片具有更好的增殖以及成骨能力。结论:钛片经过APP处理后,再利用生物素-亲和素的特异性结合可以成功的固定特异性多肽分子,经过细胞学检测,它具有良好的生物学活性,为牙种植体表面的生物化修饰研究提供实验基础。
【关键词】：钛种植体 3-氨丙基膦酸 生物素-亲和素系统 成骨细胞特异性识别多肽
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-15
• 材料与方法15
• 第一部分 材料与试剂15-19
• 1.材料与试剂15-16
• 2.仪器与设备16-17
• 3.试剂的配置方法17-19
• 第二部分 实验方法19-27
• 1. 人成骨细胞特异性识别多肽的固定19-22
• 1.1 实验方法19-21
• 1.2 实验结果21-22
• 2.特异性识别多肽表面对人成骨细胞的生物学评价22-27
• 2.1 试验方法22-25
• 2.2 实验结果25-27
• 讨论27-33
• 结论33-34
• 参考文献34-41
• 附图41-46
• 附录 个人简历46-47
• 致谢47-48
• 综述48-58
• 参考文献55-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 孔令青;李勇;高洪;严玉霖;;生物素-亲和素标记技术[J];动物医学进展;2008年04期

2 陈卓s，

本文编号：315014