颗粒蛋白酶前体对P.g-LPS诱导的巨噬细胞M1向极化的影响及机制研究

发布时间：2021-06-09 17:20

　　背景和目的牙周炎是发生在牙周组织的感染性疾病,菌斑微生物为牙周炎发生的始动因素,宿主免疫反应为牙周组织破坏的主要因素。巨噬细胞可以分化为促炎状态的M1型和抗炎状态的M2型,当巨噬细胞被募集到牙周组织中时,其分化状态受环境刺激的影响,在细菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和/或干扰素-γ（interferon,IFN-γ）诱导下,巨噬细胞分化为促炎状态的M1型,促进宿主炎性反应以抵抗细菌和病毒,并分泌促炎因子,最终导致牙周组织破坏;相反,IL-4和/或IL-13诱导巨噬细胞分化为抗炎状态的M2型,发挥抗炎和促进组织愈合的功能,并分泌抗炎因子,促进组织的修复愈合。多项研究证实,颗粒蛋白酶前体（progranulin,PGRN）为TNF受体竞争性拮抗剂,在免疫调节和抗炎中发挥重要作用。我们先前研究证实发现牙周炎患者龈沟液中PGRN较正常龈沟液含量升高;体外实验证实PGRN促进牙周膜干细胞的成骨分化;重组PGRN可减轻大鼠实验性牙周炎炎症反应及牙槽骨吸收,促进牙周骨缺损的再生。但其在巨噬细胞极化过程中的调控作用及其机制尚不清楚。本研究旨在探讨PGRN在巨噬细胞M1向极化中... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１．ＲＡＷ２６４．７巨噻细胞培养

?山东大学硕士学位论文???ｑＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＲＡＷ２６４．７细胞经过含或不含有１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－ＬＰＳ培养??基诱导２４?ｈ后ＴＮＦ－ａ和ｉＮＯＳ?ｍＲＮＡ的表达。与对照组相比，１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－??ＬＰＳ组ＴＮＦ－ａ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达显著增高（图１－２Ｃ）。??（３）?Ｍｌ型巨噬细胞高表达ＴＮＦ－ａ和ｉＮＯＳ蛋白??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ技术检测ＲＡＷ２６４．７细胞经过含或不含有１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－ＬＰＳ??培养基诱导２４?ｈ后ＴＮＦ－ａ和ｉＮＯＳ蛋白的表达。与对照组相比，１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－??ＬＰＳ组ＴＮＦ－ａ和ｉＮＯＳ蛋白的表达显著增高（图１－２?Ｄ，Ｅ）。??（４）?Ｍｌ型Ｅ噬细胞ＴＮＦ－ａ分泌增多??ＥＬＩＳＡ技术检测ＲＡＷ２６４．７细胞经过含或不含有１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－ＬＰＳ培养基??诱导２４?ｈ后ＴＮＦ－ｃｔ的分泌。与对照组相比，１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－ＬＰＳ组ＴＮＦ－ａ的分泌??显著增高（图１－２?Ｆ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ?ｑ－ＰＣＲ??（Ａ??＜Ｕ??〇?１００１?—｜?ａ，?６〇＇?■?ＮＣ?…??〇?８０．?＂５?２?５〇?ＬＰＳ（１００?ｎｇ／ｍｌ）??Ａ?１?＾?＾?＾?３〇ｌ??Ａ?Ｍ?４〇－??…’一?：—Ｓｉ?：：??ｉ?〇ＵＰ——．＾?ｉ°?＾＿＿??ＮＣ?ＬＰＳ（１００?ｎｇ／ｍｌ）?★?＾?｜?ｙ??／?＾?＃??Ｄ?Ｅ?＾?Ｆ??一?ｋＤａ?Ｓ?ＷＢ?？?ＥＵＳＡ??ｆｌｖ?２８?｜?〇）?？§］??——?ｍ?ｎｃ?ｋ?〇６１?—??ＴＮＦ

胞因子的蛋白水平；酶联免疫吸附技术检测巨噬细胞ＴＮＦ－ａ分泌水平变化。具??体操作步骤同第一部分。??结果??１、ｒＰＧＲＮ逆转Ｐ．ｇ－ＬＰＳ升高的Ｍｌ表型分子表达或Ｍ１／Ｍ２比例??（１）流式细胞术检测ＲＡＷ２６４．７细胞Ｍｌ和Ｍ２表面标记物ＣＤ８６和ＣＤ２０６的??表达，与对照组相比，１００?ｎｇ／ｍｌ?Ｐ．ｇ－ＬＰＳ组Ｍ１／Ｍ２表面标ｉｉＺ物ＣＤ８６／ＣＤ２０６比??值显著开高，在此基础ｈ加入５，?１０，?２０ｎｇ／ｍｌｒＰＧＲＮＣ，ＣＤ８６／ＣＤ２０６的比值??显著降低。（图２－１－１）??Ａ〇１?Ｆ６６?Ａ０２?Ａ０３?ＡＤ４??，Ｇａｔｅ?ＦＩ?？?Ｃ，ａｔ＊?Ｐｉ?－？?Ｏａｔｅ?Ｐｉ?＊？?－＞？ｔｅ?Ｆｌ??＾￣ｎ?＇ＰＨ￣￣￣ｉ?二?１?８Ｔ￣１??确，－?ｉ?４?＾＼］￣＇??？＊ｉ?ｒ?Ｌｉ?－?Ｕ?ｉ?Ｉ－１?Ｕ－?Ｉ?：ｉ?ｌＲ?－？ｉ?－？?Ｕ?ｊ?Ｌ＝ｊ??５?ｎ—?ｗ＜ａ－ｉＴｎ＾?ｆ?？—，－ｉ？丨?＿?Ｈ?ｉ—￣ｎ＿?ｉ＿?”《ｒ，》、＿ｉ?气?ｒｉＷ－Ｗ＾ｗｎｗ－—－ｎＯ＇ｉＡｗ＇??＾?Ｊ?Ｊ?＾?＾?＾?＾??Ａ？（?Ａ?？?＊Ｐ－ｆ?＊?？ｆＣ?＊??ＮＣ?ＬＰＳ?（１００?ｎｇ／ｍｌ）?ＬＰＳ＋ｒＰＧＲＮ?（５?ｎｇ／ｍｌ）??Ａ〇５?Ａ０６?ＢＯ，?Ｂ０２??Ｏａｌ＊?Ｐ１?＂＿：？＊！？?Ｐ＊?＂？?Ｏａｌｓ?Ｐ１?＊？?＇？ｎ？?Ｐｉ??ｉｒ?——ｎ?＇ｐ７＂！一ｑ?＝「—ｉ）「—ｊ￣＂１??：５｜?－?－?４?４?Ａ??、?ｊ?＂?ｌｆ?Ｉ?ａ＾ｉ???＾??


本文编号：3220998