WNT7B介导的口腔鳞癌肿瘤细胞与巨噬细胞信息交互初步研究

发布时间：2021-06-11 23:18

　　口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）为口腔恶性肿瘤的主要类型,与迁延的慢性口腔炎症密切相关。近年来虽然治疗上取得一定进展,但由于原发部位延迟诊断、频繁的局部复发以及治疗后的颈部淋巴结转移,5年生存率仍然较低。实验室前期对同一病人来源的口腔扁平苔藓（oral lichen planu,OLP）和OSCC组织测序发现,相较于正常口腔黏膜,WNT信号通路配体WNT7B的表达在OLP、OSCC临床样本中呈现递增趋势。为探讨WNT7B在口腔慢性炎症和癌症发展中的作用,本课题选择肿瘤细胞与肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）之间的相互调节机制作为切入点,尝试探讨WNT7B是否参与OSCC细胞与TAMs细胞之间的信息交互。本文主要从以下几个部分开展研究:第一部分,WNT7B参与OLP和OSCC发展过程的临床验证。综合前期两位OSCC病人转录组数据以及GEO（gene expression omnibus,GEO）下载的三位病人的转录组数据分析,并结合临床病人组织qPCR及免疫组织化学实验,发现WNT7B... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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同一病人来源的癌旁正常组织、OLP和OSCC转录组测序中WNT7BmRNA的丰度

电子科技大学硕士学位论文22位），用来表示基因mRNA的丰度。同一病人来源的癌旁正常组织、OLP组织和OSCC组织的转录组数据显示：WNT7BmRNA在各组织中的丰度出现递增趋势。图3-1同一病人来源的癌旁正常组织、OLP和OSCC转录组测序中WNT7BmRNA的丰度3.2.2临床病人WNT7BmRNA表达水平验证为验证上述测序结果，我们收集了21例新鲜的临床病人的OSCC组织及其对应的癌旁正常组织，以及22例OLP组织，借助实时荧光定量qPCR检测了WNT7B在以上组织中mRNA水平上的表达情况。如图3-2所示：在临床病人的新鲜组织样本中，WNT7BmRNA在OSCC组织中显著高于癌旁正常组织和OLP组织，差异具有显著性。但相对于癌旁正常组织，OLP中WNT7BmRNA丰度没有显著差异。考虑到组织提取RNA时，炎症组织里实际包含了很多粘膜下的结缔组织成分，由此猜测在OLP中可能出现mRNA水平和蛋白水平的结果分离现象。图3-2临床病人组织WNT7BmRNA表达情况**：P<0.01

第三章WNT7B在OLP慢性炎症与OSCC发展中的作用233.2.3WNT7B蛋白在癌旁正常组织与OLP和OSCC组织中的表达为进一步验证WNT7B蛋白在组织水平的表达情况，我们收集了17例OSCC病人的癌症组织和癌旁正常组织，以及14例OLP病人组织的石蜡包埋样本，借助免疫组化技术检测其表达情况。免疫组化技术利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），来对其进行定位、定性及相对定量的研究。图3-3WNT7B蛋白在病人组织中的表达情况。左图为不同组织中WNT7B蛋白IHC染色结果，黄色箭头所示为OSCC组织中的巨噬细胞，其胞浆中出现较强的WNT7B阳性信号。ScaleBar=100μm。右侧图为各组计算免疫组化评分后的统计结果，组间采用独立样本t检验，**：P<0.01；***：P<0.005；****：P<0.001。如图3-3所示，癌旁正常组织中，上皮细胞基本为阴性。而在OLP组织中，上皮组织呈增生状态，上皮增厚，细胞形态变圆，细胞连接相对表现松散；增生的上皮细胞中，WNT7B可见于大多数细胞的胞浆和胞膜。在OSCC中，WNT7B阳性信号见于绝大多数肿瘤细胞胞浆中，阳性程度高。免疫组化评分提示OSCC阳性计分值在癌旁正常组织-OLP炎症组织-OSCC癌症组织中呈递增趋势，结果具有统计学意义。更有意思的是，OSCC组织中，我们发现组织中存在巨噬细胞浸润，其细胞核为典型的马蹄形，而细胞胞浆和胞膜中都出现较强的WNT7B阳性信号。这提示我们，可能WNT7B会是肿瘤细胞与肿瘤相关巨噬细胞间的信息交互分子之一。


本文编号：3225459