二甲双胍对人牙周膜细胞氧化损伤导致细胞衰老的影响研究

发布时间：2021-06-13 00:23

　　目的:用H₂O₂处理作为氧化应激刺激因素来诱导hPDLCs衰老,观察Met对hPDLCS衰老的作用,初步探索其作用机制。同时观察在H₂O₂和Met的作用下,hPDLCs成骨分化能力的变化。方法:1 hPDLCs的分离培养和鉴定:I型胶原酶消化人牙周膜,组织块贴壁法进行hPDLCs的原代培养;倒置显微镜下观察细胞形态,成软骨、成骨、成脂诱导后阿利新蓝、茜素红、油红O染色鉴定其多向分化能力,流式细胞术检测干细胞表面标志物（CD34、CD73、CD146和Stro-1）;取第3代hPDLCs用于后续实验。2 H₂O₂诱导hPDLCs衰老:用不同浓度的H₂O₂（50μM,100μM,200μM,300μM,500μM）处理hPDLCs,用CCK-8试剂盒检测细胞在0、1、3、5、7天的活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,筛选明显抑制hPDLCs活性但不显著促进其凋亡的最适H₂O₂浓... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

hPDLCs形态学观察A:第5天，hPDLCs在组织块周围呈放射状生长；B:第3代X40X40

1-1 hPDLCs 形态学观察 A:第 5 天，hPDLCs 在组织块周围呈放射状生长；B:第 3 代hPDLCs 呈长梭形。.1-1 The morphological observation of hPDLCsA: hPDLCs grow radically around theissue block on the fifth day; B: hPDLCs at passage 3 show long spindle morphology.人牙周膜细胞多向分化能力的鉴定PDLCs 在成软骨诱导 14 天后，用阿利新蓝染色，结果显示:hPDLCs 出现 1-2A）。hPDLCs 在成骨诱导 21 天后，用茜素红染色，结果显示：hPDL红染的矿化结节（图 1-2B）。hPDLCs 在成脂诱导 14 天后，hPDLCs 形态，有白色脂滴形成（图 1-2C），油红 O 染色阳性（图 1-2D）。40 X40

染色; C: 成脂诱导后白色脂滴形成；D 油红 O 染色。Identification of multipotential differentiation of hPDLCsA:Alcian blue stains induced by chondrogenic induction medium; B:Alizarin Red staining of hPD by osteogenic induction medium; C: Formation of white fat droplets; D: Oil rstaining of hPDLCs induced by adipogenic induction medium.周膜细胞分子表型鉴定周膜细胞细胞第 4 代，经流式细胞术鉴定结果如下：间充质干细胞原表达（图 1-3A、B、C）：CD73：98.58%；CD146：85.89%；St血系细胞表面抗原表达(图 1-3D)：CD34：0.13%。说明细胞为间充髓来源，并且具有干细胞特性。

【参考文献】：
期刊论文
[1]三种方法原代培养人牙周膜细胞[J]. 蒋俊强,王忠朝,黎春晖,蔡炜.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(23)
[2]人牙周膜细胞原代培养及鉴定[J]. 李隽,胥春,郝轶,张富强.  上海交通大学学报(医学版). 2008(11)
[3]改良组织块法体外培养人牙周膜细胞和牙髓细胞[J]. 江龙,朱亚琴.  牙体牙髓牙周病学杂志. 2008(04)



本文编号：3226605