ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌重组菌毛蛋白诱导HUVECs天然免疫反应信号转导的研究

发布时间：2021-06-22 21:57

　　目的：通过研究TLRs阻断剂对P. gingivalis诱发HUVECs炎症反应信号转导通路下游信号分子及HUVEC分泌炎性因子的影响,探讨P. gingivalis影响和调节内皮细胞天然免疫和炎症反应的作用机制及信号转导通路,并为As及其相关CVD的防治提供新的思路。方法：标准条件下厌氧培养ⅣfimA型P. gingivalis（W83）,收集菌液提取细菌DNA,克隆ⅣfimA型P. gingivalis（W83）的fimA序列,构建fimA的原核表达系统pET-30a-FimA BL21DE3, IPTG诱导表达重组菌毛蛋白rFimA;体外培养HUVECs,待HUVECs单层融合后,分别加入anti-TLR2单克隆抗体和anti-TLR4单克隆抗体孵育30min后,再加入不同浓度的Ⅳ型rFimA,共同培养2h、6h和24h,采用RT-PCR检测TLR信号转导通路接头分子MyD88及HUVECs中致炎细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）,趋化因子（IL-8和MCP-1）,粘附分子（ICAM-1和VCAM-1）的mRNA表达水平；IHC定性分析NF-κB的核移位；ELISA法测... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：113 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BHI血琼脂平板r的P.RinAivalis呈黑色、圆形凸起的光滑菌落

尸gingivalis在BHI血琼脂平板上，呈现黑色凸起、表面光滑、边界清楚的圆形菌落(见图图1一 33BHI血琼脂平板卜的尸梦卿valis呈黑色、圆形凸起的光滑菌落口...‘，，，·奋t毛犷.少.匕，口p.口、了.产、图1一34尸乡卿vali，革兰染色光镜下呈革兰阴性球杆菌10x100倍

△△Ct=(Ct^目的基因一Ct^内参基因)一(CtB目的基因一CtB内参基因)TLRZ阻断剂作用于不同浓度IV型rFilnA蛋白刺激HUVECs，细胞表达IL一lpmRNA如表1一2和图1一37所示，经ANOVA一LSD多重比较分析显示:Tz、TZ、T3组在Zh、6h、24h时，IL一lpmRNA相对表达量与阳性和阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>O.OS)。表1一 2TLRZ阻断剂作用于不同浓度W型rFIlllA刺激HIJvECs表达IL一lplllRNA水平的比较IL一lpmRNA的相对表达量组别一一一一石厂一—下订一一一一一-一一-—-三丽一一-一一一一一阴性对照阳性对照 1.330士0.095 0.743士0.083 1.135士0.08] 1.573士0.064].517士0.043 1.244士0.108 1.396士0.161 1.197士0.299 1.292士0.085 1.454士0.135 1.511士0.210 1.799士0.022 1.455士0.262 1.539士0.157 2.020士0.168 T]TZT3TLRZ阻断剂作用于不同浓度IV型rFiniA刺激Ht氏旧Cs表达ILlpzl识NA水平的比较 2.5—口阴性对照组目阳性对照组.TI’口TZ.T3泪那嚼蔺==交z“呼任，三6h时间图1一 37TLRZ阻断剂作用于不同浓度IV型rFimA刺激HUVEcs表达IL一甲mRNA水平的比较 2.4.2TLRZ阻断剂对不同浓度W型rFin1A刺激HUVECs表达IL一 6mRNA的影响在本实验条件下，各实验组中 HuvEcSIL一6基因和GAPDH内参基因的mRNA表达均以Ct值表示。根据样本Ct值以内参基因GAPDH的Ct值对IL一6拷贝数加以校正，计算得到样本中IL一6的拷贝数△Ct值。实验组间 HUVECSIL一 6mRNA相对表

【参考文献】：
期刊论文
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[2]口腔致病菌与动脉粥样硬化的研究进展[J]. 张明珠,梁景平.  国际口腔医学杂志. 2008(01)
[3]不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌在慢性牙周炎患者中的分布[J]. 郭永华,吴亚菲,刘天佳,肖晓蓉,周斌,周雪平.  华西口腔医学杂志. 2005(02)



本文编号：3243593