变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因gluA突变的检测

发布时间：2021-07-31 09:20

　　变形链球菌是一种革兰阳性球菌,且为牙菌斑内的常居菌,是龋病的主要致病菌。氟化物的应用能大大降低龋病的发生率,它能抑制葡糖基转移酶的活性,并且随着浓度增加,此抑制作用逐渐增强。在防治龋病方面取得了显著疗效,但长期的应用可使变形链球菌发生突变,而产生变形链球菌的耐氟菌株。耐氟菌株的产酸和耐酸能力更强,致龋能力也随之增强,但其毒力的增强是否与基因突变有关目前尚不清楚。变形链球菌耐氟菌株耐酸能力的提高,一直受到国内外学者的广泛关注。目前在一些原核生物中已分离、测序并克隆了多个耐酸性相关的基因,本课题组前期已检测出耐酸相关基因ffh、dgk、dltc等并登陆美国GenBank。本实验以耐酸相关基因gluA为目的基因。首先在体外人工诱导变形链球菌耐氟菌株（UA159-FR）,根据GenBank发表的变形链球菌gluA基因序列,依据耐酸相关基因gluA的同源性,从最保守区设计一对引物进行PCR,获得变形链球菌耐氟菌株耐酸基因gluA的基因序列,利用pMD18-T载体进行T/A克隆,构建重组质粒,并进行测序鉴定。结果变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因gluA未发生突变,为明晰变形链球菌耐酸性打下理论基础。 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
内容提要
第1章 前言
第2章 实验
    2.1 材料
        2.1.1 细菌与质粒
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 试剂和培养基
    2.2 方法
        2.2.1 变形链球菌耐氟菌株的诱导
        2.2.2 变形链球菌耐氟菌株基因组的提取
        2.2.3 引物设计
        2.2.4 PCR反应
        2.2.5 PCR产物的鉴定
        2.2.6 PCR产物的回收
        2.2.7 PCR产物连接入pMD18-T载体中
        2.2.8 制备大肠杆菌感受态细胞
        2.2.9 转化
        2.2.10 重组质粒的提取
        2.2.11 重组质粒的酶切鉴定
        2.2.12 测序
        2.2.13 本实验重复三次
    2.3 结果
        2.3.1 PCR 产物
        2.3.2 重组质粒
        2.3.3 附图
        2.3.4 测序结果分析
第3章 讨论
    3.1 变形链球菌耐氟菌株的研究意义
    3.2 基因突变的研究意义
    3.3 变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因gluA的研究意义
第4章 结论
参考文献
致谢
中文摘要
Abstract


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法[J]. 代红星,张庆桥,樊宝良.  安徽农业科学. 2008(29)
[2]变形链球菌耐氟菌株与亲代菌株质子移位膜ATP酶活性的比较[J]. 盛江筠,黄正蔚,刘正.  上海口腔医学. 2005(01)
[3]变形链球菌耐氟株质子移位ATP酶活性的体外研究[J]. 于丹妮,陈锦英,殷晓萍,司进.  中华医院感染学杂志. 2005(01)
[4]氟钼酸铵影响变形链球菌粘附性的研究[J]. 马宏,李玉晶.  实用口腔医学杂志. 2004(03)
[5]变形链球菌的传播研究方法及影响因素研究进展[J]. 李颂.  国外医学.口腔医学分册. 2002(05)
[6]质子通透性与变形链球菌耐酸性关系的研究[J]. 卫华.  口腔医学纵横. 2002(01)
[7]变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株超微结构观察[J]. 盛江筠,刘正,李鸣宇.  牙体牙髓牙周病学杂志. 2001(06)
[8]变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株DNAG+C含量测定[J]. 盛江筠,刘正.  上海口腔医学. 2001(01)
[9]变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株粘附能力的体外研究[J]. 盛江筠,刘正.  上海口腔医学. 2000(03)
[10]变形链球菌耐氟菌株的诱导及产酸性的实验研究[J]. 盛江筠,刘正.  中华口腔医学杂志. 2000(02)



本文编号：3313196