牙髓干细胞/PGA支架在TDM上构建牙周支持组织的研究

发布时间：2021-08-04 02:07

　　目的:本研究将比格犬的DPSCs和PDLSCs进行体外分离、培养、鉴定,比较分析两种干细胞的不同特性,并分别将cDPSCs和cPDLSCs复合PGA支架并接种在TDM表面,异位移植于比格犬的肾囊膜下,观察并比较两者在TDM周围牙周支持组织样结构的形成情况。方法:1.采用酶消化法分离培养比格犬的DPSCs和PDLSCs,倒置显微镜下观察细胞形态;克隆形成率和CCK 8检测法评价增殖能力;通过细胞免疫组化鉴定细胞来源;流式细胞术检测两种细胞表面标志物;成骨、成脂及成软骨诱导检测两种细胞多向分化的能力。2.分别将cDPSCs和cPDLSCs复合PGA支架并接种在TDM表面,体外静态力学刺激培养2周,倒置显微镜下观察细胞与支架的生物相容性。3.用慢病毒介导的GFP转染cDPSCs,倒置荧光显微镜下观察cDPSCs形态、生长情况及GFP荧光的表达强度,并将其复合PGA支架同方法2。4.将体外力学刺激培养2周的cDPSCs-PGA-TDM、cPDLSCs-PGA-TDM、PGA-TDM（空白组）及cDPSCs-GFP-PGA-TDM,异位移植于比格犬的肾囊膜下。术后8周取材,常规的固定、脱钙、包埋... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

cDPSCs和cPDLSCs的形态学观察A:cDPSCs原代培养3d（×40）；B:cPDLSCs原代培养5d（×40）；C:cDPSCs原代培养12d（×40）；D:cPDLSCs原代培养15d（×40）；E:P1代cDPSCs生长情况

福建医科大学硕士学位论文DPSCs、cPDLSCs 增殖能力的检测生长曲线的测定cDPSCs、cPDLSCs 的增殖曲线，符合细胞对数生长曲线，呈现明显的“S包括：潜伏期、对数生长期、平台期。接种 1-2 天，生长缓慢，处于潜伏期-6 天，细胞增殖较旺盛，数量大幅度增加，处于对数生长期，第 7 天进入，开始出现缓慢下降。从第二天开始，cDPSCs 的增殖能力明显强于 cPDLSC具有统计学意义（n=3，P<0.05，图 1-2）。

18图 1-3 cDPSCs 和 cPDLSCs 的克隆形成能力的比较A 和 B: 结晶紫染色显示 cDPSCs 和 cPDLSCs 形成的单克隆集落（×40）； C 和 D:cDPSCs 和 cPDLSCs 全部克隆集落结晶紫染色大体观察； F:cDPSCs 和 cPDLSCs 的克隆形成率的比较（P<0.05）Figure 1-3 Comparison of cloning ability of cDPSCs and cPDLSCsAand B: Crystal Violet Stain showing monoclonal colonies formed by cDPSCs andcPDLSCs (×40); C and D: Gross observations of clone colonies of cDPSCs and cPDLSCsstained by crystal violet; F: Comparison of colony formation rates of cDPSCs andcPDLSCs (P) <0.05)


本文编号：3320779