载药纳米微粒调控人牙龈成纤维细胞NLRP3炎症小体通路的研究

发布时间：2021-08-13 22:36

　　目的:本项目拟制备壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米粒（CS/CMCS-NPs）负载多西环素（Dox）后形成的复合纳米粒体系（Dox:CS/CMCS-NPs）,研究其理化性质、细胞相容性和抗菌性能;构建人牙龈成纤维细胞（HGFs）中由牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.gingivalis-LPS）和三磷酸腺苷（ATP）联合诱导而出的NLRP3炎症小体模型,研究Dox:CS/CMCS-NPs复合纳米粒体系对人牙龈成纤维细胞中NLRP3炎症小体的抑制作用。方法:1.人牙龈成纤维细胞原代培养、鉴定及NLRP3炎症小体模型的构建与抑制:组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞,采用免疫荧光法对其进行鉴定;用牙龈卟啉单胞菌脂多糖联合三磷酸腺苷诱导人牙龈成纤维细胞构建NLRP3炎症小体模型,并用多西环素调控细胞模型,实时荧光定量聚合酶链式反应法、酶联免疫吸附法及蛋白质印迹法检测其相关mRNA及蛋白的表达量。2.包载多西环素的复合纳米粒体系Dox:CS/CMCS-NPs及不包载多西环素的纳米粒CS/CMCS-NPs的制备及性质检测:采用离子交联法制备Dox:CS/CMCSNPs及CS/CMCS-NPs复合纳米粒体系;采用... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

光学显微镜下原代细胞照片(A)；荧光显微镜下原代细胞照片(B,C)

青岛大学硕士学位论文9CCK-8结果，选定1.0μg/ml为本实验建立炎症小体细胞模型的P.gingivalis-LPS浓度。图2低倍镜下HGFs经P.gingivalis-LPS(0,0.25,0.5,1.0,2.0,5.0μg/ml)刺激12小时及48小时的细胞照片(A)；HGFs经P.gingivalis-LPS(0,0.25,0.5,1.0,2.0,5.0μg/ml)刺激12小时、24小时及48小时的CCK-8检测结果(B)。图3HGFs经P.gingivalis-LPS(0,0.25,0.5,1.0,2.0,5.0μg/ml)刺激12小时后Pro-caspase-1的蛋白表达量(A)及其灰度值分析(B)。

第一章多西环素抑制牙周炎的作用机制103.3多西环素适宜浓度的筛选如图4所示，牙龈成纤维细胞在1.0,5.0,10.0,20.0及50.0μg/ml浓度的多西环素刺激下，培养3小时及5小时后的OD值与对照组相比无统计学差异(P>0.05)；而在培养7小时后，可见10.0μg/ml组相较于对照组OD值明显升高(P<0.05)，说明细胞的增殖能力较对照组增强。20.0与50.0μg/ml组的牙龈成纤维细胞与对照组相比OD值无统计学差异，一定程度上说明多西环素的浓度过大会抑制细胞的生长。图4HGFs在不同浓度多西环素(0,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μg/ml)下的CCK-8结果3.4人牙龈成纤维细胞中NLRP3炎症小体的表达与抑制如图5A-D所示，LPS组、ATP组与Dox组中NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1β的mRNA表达量与空白组相比，无统计学差异(P>0.05)；当用LPS和ATP共同刺激牙龈成纤维细胞时，NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1β的mRNA表达量与空白组相比明显升高(P<0.05)；当用Dox刺激LPS+ATP组时，NLRP3炎症小体相关mRNA的表达量均有所下降(P<0.05)，但对比空白组仍较高(P<0.05)。单独使用LPS时，细胞上清液中IL-1β的蛋白表达量相比空白组有所上升；当加入ATP协同作用时，IL-1β的蛋白表达量急剧升高，差异具有明显的统计学意义(P<0.01)，而应用Dox可以显著降低细胞上清液中IL-1β的蛋白表达量(P<0.05)（图5E）。


本文编号：3341248