MMP-9在去势大鼠正畸牙齿压力侧牙槽骨表达的研究
发布时间：2021-08-26 09:16
目的:比较不同正畸加力时间牙槽骨压力侧破骨细胞数和MMP-9表达水平,探讨骨质疏松对正畸力作用下骨代谢的影响。方法:取6月龄雌性Wistar大鼠50只,随机分为去势组和对照组（每组25只）。去势组大鼠切除双侧卵巢建立骨质疏松模型。术后6个月,于两组大鼠上颌双侧磨牙与中切牙之间安装矫治器,并施以0.49 N的拉力。分别于加力后0、5、7、10、14 d取材,免疫组化及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法检测各组大鼠上颌第一磨牙压力侧牙周组织中MMP-9表达水平及破骨细胞数。结果:去势组和对照组大鼠移动牙齿压力侧MMP-9表达水平及破骨细胞数均随加力时间延长而增加,加力7 d时达到高峰,10 d后逐渐降低;相同加力时间点内两组相比,去势组MMP-9的表达和破骨细胞数均高于对照组,除加力14 d时两组破骨胞数无统计学差异（P>0.05）外,其他差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:骨质疏松状态下大鼠正畸移动牙齿压力侧牙槽骨吸收活动增强。
【文章来源】：牙体牙髓牙周病学杂志. 2013,23(07)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
去卵巢手术
?0只6月龄Wistar大鼠(雌性，体质量260g左右)(河北医科大学动物实验中心提供)，适应性饲养1周后，戊巴比妥钠腹腔注射(2．2mL/500g)麻醉，随机分为去势组和对照组，每组25只。去势组大鼠切除双侧卵巢，以造成雌激素缺乏的骨质疏松实验动物模型;对照组大鼠只切除卵巢周围的小块脂肪组织，不切除双侧卵巢(图1)，然后分笼饲养，自由饮水和摄食。术后6个月分别在所有大鼠的双侧上颌第一磨牙与中切牙之间安装钛镍螺旋弹簧，打开弹簧使其产生约0．49N的拉力，牵引上颌第一磨牙向近中移动，建立正畸牙齿移动的动物实验模型(图2)。图1去卵巢手术图2正畸加力矫治器的安装1．2取材和标本制备分别于正畸加力后0(不加力)、5、7、10、14d各时间点，从两组大鼠中各随机抽取5只大鼠，40g/L多聚甲醛心脏灌注处死;解剖出各大鼠的双侧上颌骨并切取包括第一磨牙及其牙周组织的骨段。置于40g/L多聚甲醛固定液中固定72h。固定后的所有标本经EDTA液脱钙至可以用大头针轻松刺透牙齿后，石蜡包埋，平行于第一磨牙长轴沿近、远中向制作5μm厚的切片。1．3HE染色观察取各组各时间点组织切片，HE染色后光学显微镜下观察压力侧组织变化情况。1．4TＲAP染色观察破骨细胞数量取各组各时间点石蜡切片脱蜡至水，浸于固定液中30s后，置于新鲜配制的TＲAP染液(sigma公司，美国)中37℃避光孵育1h;苏木素复染，光学显微镜下进行破骨细胞计数。1．5免疫组化染色检测MMP－9表达取各组各时间点石蜡切片脱蜡至水，滴加胰蛋白酶消化液(1∶3)37℃孵育15min进行抗原修复;PBS冲洗3次(每次5min)，滴加MMP－9多克隆抗体(1∶100，北京中杉)，37℃孵育1．5h;采用山羊超敏两步法免疫组化试剂盒(北京中杉)按说明书进行MMP－9免疫组化染色，以PBS代替一抗作为阴性对?
与对照组相比，去势组加力后牙周组织变化更明显，骨小梁变薄变少，且排列稀松;骨髓腔增大，其中可见大量炎性细胞浸润，牙槽骨表面可见大量骨吸收陷窝(图3b);加力10d和14d时，出现玻璃样变组织。a．对照组b．去势组图3加力7d时HE染色观察(×200)2．2各组移动牙齿压力侧破骨细胞数比较TＲAP染色显示，去势组和对照组大鼠移动牙齿压力侧牙周组织中TＲAP染色呈阳性的破骨细胞数量均随加力时间延长而增多，7d时达到高峰，10d后逐渐减少;在相同加力时间点上去势组破骨细胞数均多于对照组(除14d外)，差异有统计学意义(P＜0．05)(表1、图4)。表1各组大鼠移动牙压力侧牙周组织中破骨细胞数比较(n=10，x珋±s)加力时间(d)对照组去势组tP02．50±1．274．60±0．97－4．1630．00053．90±1．208．20±1．55－6．9450．00077．50±1．0812．30±1．83－7．1470．000105．20±1．327．50±1．08－4．2710．000144．00±0．824．10±0．74－0．2870．777a．对照组b．去势组图4加力7d时破骨细胞TＲAP染色观察(×400)2．3各组移动牙齿压力侧MMP－9表达情况免疫组化结果显示，MMP－9阳性着色为棕黄色，主要位于牙周膜成纤维细胞和破骨细胞的胞浆中(图5)。半定量分析显示，未加力(0d)时对照组和去势组大鼠牙周组织中MMP－9的表达均较低，随着加力时间延长，对照组和去势组大鼠移动牙压力侧牙周组织中MMP－9的表达均逐渐增强，7d达到高峰，10d后逐渐降低，在相同加力时间点上去势组牙周组织中MMP－9表达均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0．05)(表2)。表2MMP－9在各组大鼠移动牙压力侧牙周组织中的MMP－9表达水平比较(n=10，M±Q)加力时间(d)对照组去势组ZP00．06678±0．008000．08597±0．01836－3．0990．00250．12501±0．
【参考文献】：
期刊论文
[1]正畸牙移动的组织学改变[J]. 仝毅. 国外医学.口腔医学分册. 1987(05)
硕士论文
[1]雌激素对破骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响[D]. 叶凡.东南大学 2005
本文编号：3363971
【文章来源】：牙体牙髓牙周病学杂志. 2013,23(07)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
去卵巢手术
?0只6月龄Wistar大鼠(雌性，体质量260g左右)(河北医科大学动物实验中心提供)，适应性饲养1周后，戊巴比妥钠腹腔注射(2．2mL/500g)麻醉，随机分为去势组和对照组，每组25只。去势组大鼠切除双侧卵巢，以造成雌激素缺乏的骨质疏松实验动物模型;对照组大鼠只切除卵巢周围的小块脂肪组织，不切除双侧卵巢(图1)，然后分笼饲养，自由饮水和摄食。术后6个月分别在所有大鼠的双侧上颌第一磨牙与中切牙之间安装钛镍螺旋弹簧，打开弹簧使其产生约0．49N的拉力，牵引上颌第一磨牙向近中移动，建立正畸牙齿移动的动物实验模型(图2)。图1去卵巢手术图2正畸加力矫治器的安装1．2取材和标本制备分别于正畸加力后0(不加力)、5、7、10、14d各时间点，从两组大鼠中各随机抽取5只大鼠，40g/L多聚甲醛心脏灌注处死;解剖出各大鼠的双侧上颌骨并切取包括第一磨牙及其牙周组织的骨段。置于40g/L多聚甲醛固定液中固定72h。固定后的所有标本经EDTA液脱钙至可以用大头针轻松刺透牙齿后，石蜡包埋，平行于第一磨牙长轴沿近、远中向制作5μm厚的切片。1．3HE染色观察取各组各时间点组织切片，HE染色后光学显微镜下观察压力侧组织变化情况。1．4TＲAP染色观察破骨细胞数量取各组各时间点石蜡切片脱蜡至水，浸于固定液中30s后，置于新鲜配制的TＲAP染液(sigma公司，美国)中37℃避光孵育1h;苏木素复染，光学显微镜下进行破骨细胞计数。1．5免疫组化染色检测MMP－9表达取各组各时间点石蜡切片脱蜡至水，滴加胰蛋白酶消化液(1∶3)37℃孵育15min进行抗原修复;PBS冲洗3次(每次5min)，滴加MMP－9多克隆抗体(1∶100，北京中杉)，37℃孵育1．5h;采用山羊超敏两步法免疫组化试剂盒(北京中杉)按说明书进行MMP－9免疫组化染色，以PBS代替一抗作为阴性对?
与对照组相比，去势组加力后牙周组织变化更明显，骨小梁变薄变少，且排列稀松;骨髓腔增大，其中可见大量炎性细胞浸润，牙槽骨表面可见大量骨吸收陷窝(图3b);加力10d和14d时，出现玻璃样变组织。a．对照组b．去势组图3加力7d时HE染色观察(×200)2．2各组移动牙齿压力侧破骨细胞数比较TＲAP染色显示，去势组和对照组大鼠移动牙齿压力侧牙周组织中TＲAP染色呈阳性的破骨细胞数量均随加力时间延长而增多，7d时达到高峰，10d后逐渐减少;在相同加力时间点上去势组破骨细胞数均多于对照组(除14d外)，差异有统计学意义(P＜0．05)(表1、图4)。表1各组大鼠移动牙压力侧牙周组织中破骨细胞数比较(n=10，x珋±s)加力时间(d)对照组去势组tP02．50±1．274．60±0．97－4．1630．00053．90±1．208．20±1．55－6．9450．00077．50±1．0812．30±1．83－7．1470．000105．20±1．327．50±1．08－4．2710．000144．00±0．824．10±0．74－0．2870．777a．对照组b．去势组图4加力7d时破骨细胞TＲAP染色观察(×400)2．3各组移动牙齿压力侧MMP－9表达情况免疫组化结果显示，MMP－9阳性着色为棕黄色，主要位于牙周膜成纤维细胞和破骨细胞的胞浆中(图5)。半定量分析显示，未加力(0d)时对照组和去势组大鼠牙周组织中MMP－9的表达均较低，随着加力时间延长，对照组和去势组大鼠移动牙压力侧牙周组织中MMP－9的表达均逐渐增强，7d达到高峰，10d后逐渐降低，在相同加力时间点上去势组牙周组织中MMP－9表达均高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0．05)(表2)。表2MMP－9在各组大鼠移动牙压力侧牙周组织中的MMP－9表达水平比较(n=10，M±Q)加力时间(d)对照组去势组ZP00．06678±0．008000．08597±0．01836－3．0990．00250．12501±0．
【参考文献】：
期刊论文
[1]正畸牙移动的组织学改变[J]. 仝毅. 国外医学.口腔医学分册. 1987(05)
硕士论文
[1]雌激素对破骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响[D]. 叶凡.东南大学 2005
本文编号：3363971
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/3363971.html
最近更新
教材专著
