miR-214-3p通过β-连环蛋白/TCF-4信号通路抑制牙囊细胞成骨分化的体外研究
发布时间：2021-08-28 05:08
目的:探讨MicroRNA-214-3p（miR-214-3p）通过β-连环蛋白/TCF-4信号通路对于牙囊细胞（DFCs）成骨分化中的影响。方法:通过双向差速传代法体外分离,培养与提纯牙囊细胞,通过向DFCs中转染miR-214模拟物（mimics）及抑制物（inhibitor）以此上调及下调DFCSs中的miR-214的表达。经成骨诱导7天后,通过qRT-PCR、茜素红染色、免疫蛋白印迹证明miR-214及相关成骨基因的表达变化,以及β-连环蛋白（β-catenin）/TCF-4通路相关蛋白的变化。结果:RT-qPCR结果显示:（1）DFCs成骨诱导后miR-214的表达下降。（2）使用Lipo3000将miR-214mimics与inhibitor转染进入DFCs可以相应上调及下调DFCs中miR-214的表达。（3）miR-214上调可使DFCs在成骨诱导过程中的成骨相关基因ALP（P<0.01）,OSN（P>0.05）,RUNX-2（P>0.05）的mRNA下调,miR-214下调可使DFCs在成骨诱导过程中的成骨相关基因ALP,OSN,RUNX-2的mRN...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代DFCs（×50倍）
新疆医科大学硕士学位论文17注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；**:p＜0.01，差异有统计学意义图3转染miR214mimics及miR214inhibitor后1、2、3dmiR214表达情况Fig.3ExpressionofmiR2141,2and3daysaftertransfectionofthemiR214mimicsandmiR214inhibitor3成骨诱导后DFCs表达miR-214的相关检测取成骨诱导7天后的DFCs作为实验组，进行成骨诱导后miR-214表达的检测。与正常的DFCs相比，其miR-214的表达低于正常DFCs（P＜0.05）。注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；图4成骨诱导7天后DFCs中miR-214的表达Fig.4ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinduction
新疆医科大学硕士学位论文184转染后DFCs经成骨诱导后的miR-214的表达取转染miR-214inhibitor、miR-214mimics及未行转染的DFCs（NC组），均进行成骨诱导7天的DFCs进行成骨诱导后miR-214的检测，可见转染后7天miR-214mimics组中miR-214的表达依旧较NC组高24倍，而miR-214inhibitor组经7天的成骨诱导后其表达miR-214依旧低于NC组。说明转染效果依然存在。注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；**:p＜0.01，差异有统计学意义图5转染miR-214mimics及miR-214inhibitor并成骨诱导7天后miR-214的表达情况Fig.5ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinductionaftertransfectionofmicroRNA-214mimicsandmicroRNA-214inhibitor5成骨相关基因mRNA表达的检测取转染miR-214inhibitor、miR-214mimics及正常DFCs组（NC组），均进行成骨诱导7天的DFCs进行成骨诱导后成骨相关基因（ALP,OCN,RUNX-2）的检测，可见miR-214mimics转染后，其成骨相关基因的表达均低于NC组但OSN及RUNX-2（p＞0.05）无统计学差异，而miR-214inhibitor转染后，其成骨相关基因OCN及RUNX-2的表达远高于NC组,但ALP上调不明显。
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响[J]. 杨雁,刘行仁,金钊. 四川大学学报(医学版). 2019(02)
[2]miR对骨质疏松骨代谢信号通路影响的研究进展[J]. 宋敏,巩彦龙,刘涛,董万涛,李清林,孙定平,周灵通. 中国骨质疏松杂志. 2016(09)
[3]无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义[J]. 王丽萍,李伯琦,王琪,铁晓敏,刘奕杉. 华西口腔医学杂志. 2016(04)
[4]双向差速法纯化大鼠牙囊细胞[J]. 王丽萍,李伯琦,铁晓敏,王琪,刘奕杉. 口腔疾病防治. 2016(03)
本文编号：3367859
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代DFCs（×50倍）
新疆医科大学硕士学位论文17注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；**:p＜0.01，差异有统计学意义图3转染miR214mimics及miR214inhibitor后1、2、3dmiR214表达情况Fig.3ExpressionofmiR2141,2and3daysaftertransfectionofthemiR214mimicsandmiR214inhibitor3成骨诱导后DFCs表达miR-214的相关检测取成骨诱导7天后的DFCs作为实验组，进行成骨诱导后miR-214表达的检测。与正常的DFCs相比，其miR-214的表达低于正常DFCs（P＜0.05）。注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；图4成骨诱导7天后DFCs中miR-214的表达Fig.4ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinduction
新疆医科大学硕士学位论文184转染后DFCs经成骨诱导后的miR-214的表达取转染miR-214inhibitor、miR-214mimics及未行转染的DFCs（NC组），均进行成骨诱导7天的DFCs进行成骨诱导后miR-214的检测，可见转染后7天miR-214mimics组中miR-214的表达依旧较NC组高24倍，而miR-214inhibitor组经7天的成骨诱导后其表达miR-214依旧低于NC组。说明转染效果依然存在。注：*：p＜0.05，差异有统计学意义；**:p＜0.01，差异有统计学意义图5转染miR-214mimics及miR-214inhibitor并成骨诱导7天后miR-214的表达情况Fig.5ExpressionofmicroRNA-214after7daysofosteoinductionaftertransfectionofmicroRNA-214mimicsandmicroRNA-214inhibitor5成骨相关基因mRNA表达的检测取转染miR-214inhibitor、miR-214mimics及正常DFCs组（NC组），均进行成骨诱导7天的DFCs进行成骨诱导后成骨相关基因（ALP,OCN,RUNX-2）的检测，可见miR-214mimics转染后，其成骨相关基因的表达均低于NC组但OSN及RUNX-2（p＞0.05）无统计学差异，而miR-214inhibitor转染后，其成骨相关基因OCN及RUNX-2的表达远高于NC组,但ALP上调不明显。
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响[J]. 杨雁,刘行仁,金钊. 四川大学学报(医学版). 2019(02)
[2]miR对骨质疏松骨代谢信号通路影响的研究进展[J]. 宋敏,巩彦龙,刘涛,董万涛,李清林,孙定平,周灵通. 中国骨质疏松杂志. 2016(09)
[3]无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义[J]. 王丽萍,李伯琦,王琪,铁晓敏,刘奕杉. 华西口腔医学杂志. 2016(04)
[4]双向差速法纯化大鼠牙囊细胞[J]. 王丽萍,李伯琦,铁晓敏,王琪,刘奕杉. 口腔疾病防治. 2016(03)
本文编号：3367859
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