TNF-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路影响的实验研究
发布时间：2021-09-15 08:25
目的:研究肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路的影响,初步探讨在肿瘤坏死因子-α影响下Notch信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用。方法:采用酶消化联合组织块法获取牙周膜干细胞,通过流式细胞仪检测间充质干细胞表面标记物CD105、CD90、CD146、CD45、CD31的表达,将牙周膜干细胞分为实验组（肿瘤坏死因子-α浓度为1Ong/ml）和对照组（肿瘤坏死因子-α浓度为Ong/ml）,使用CCK-8法检测牙周膜干细胞增殖能力;通过碱性磷酸酶活性实验、茜素红染色实验、实时定量PCR实验,检测肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞成骨能力的影响;实时定量PCR检测Notch信号通路受体Notchl、Notch2、Notch3;配体JAG1、JGA2、DLL1;细胞内效应分子Hes-1的表达。结果:流式细胞仪检测结果显示CD105、CD90及CD146表达阳性,CD45、CD31表达阴性;CCK-8法结果显示肿瘤坏死因子-α能够促进牙周膜干细胞增殖能力（P<0.05）:碱性磷酸酶活性结果显示,实验组与对照组相比,碱性磷酸酶活性降低（P<0.05）;茜素红染色...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
流式细胞仪细胞表型鉴定结果
原代ＰＤＬＳＣｓ培养至第３天可见有细胞从组织边缘爬出（附录图１），继续培养??至第８天组织周围细胞汇合至８０％？９０％时，即可传代，细胞传至第３代时细胞轮??廓清晰，形态单一，均呈长梭型，生长状态良好（附录图２）。??２?ＰＤＬＳＣｓ流式分子鉴定??流式细胞鉴定ＰＤＬＳＣｓ的结果，从左至右依次为ＣＤ１０５ＣＤ３１；?ＣＤ９０ＣＤ４５；??ＣＤ１４６；?ＢＬＡＮＫ，其中ＣＤ１０５和ＣＤ９０阳性率为９０％及９５．６％，ＣＤ１４６阳性率为??１７°／。，ＣＤ３１?及?ＣＤ４５?阳性率为?０．６％及?０．７％?（图?１?）。??：，．，Ｕ：．．．．．晨—，－氣」???Ｍ｜?１０＊０１０＊?１０＊?１０＊?ｔｏ＊?ｆ?＾?〇?１０２?｜〇３?１０＊?｜〇＊?Ｄ?？〇ａ?ｌｆｌＪ?＼０＊?１０＊?０?Ｉｆｔ＊?ｔｏＪ?！０＊?１０＊??图１流式细胞仪细胞表型鉴定结果??Ｆｉｇ．ｌ?Ｃｅｌｌ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＦＡＣＳ??３?ＰＤＬＳＣｓ实验组与对照组细胞增殖能力比较??连续７天的ＣＣＫ－８实验结果显示（表３、图２），ｗｊ？以看出细胞经历了潜伏期，快??速生长期，缓慢生长期，第１？３ｄ为潜伏期，４？５?ｄ为快速生长期，细胞数量呈对数??增长
成骨诱导液连续培养２１天后，茜素红染色显示实验组与对照组均有矿化结节生??成，与实验组（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）相比，对照组（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ｏｃ）矿化结节染色较深、??数量多且形成的范围较广泛（附录图３），而实验组（ｌＯｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）结节染色浅、??数量少且范围较小（附录图４）。??４．?２?ＡＬＰ活性检测实验结果比较??实验组与对照组分别于１、３、５、７天，终止矿化，分别检测ＡＬＰ活性，结果显??示（表４、图３），实验组ＰＤＬＳＣｓ与对照组ＰＤＬＳＣｓ?ＡＬＰ活性均逐渐增加，同时实验??组（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓＡＬＰ表达明显低于对照组（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓ，??差异具有统计学意义〇Ｐ＜〇．〇５）。??表４实验组与对照组碱性磷酸酶的活性（ＯＤ，无±ｘ）??Ｔａｂｌｅ?４?Ａｌｋａｌｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＰＤＬＳＣｓ?ｉｎ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ??（ＯＤ，?ｘ±ｓ）??培养时间（天／ｄ）??组别????１３?５?７??对照组?０．０１２土０．００１?０．０１７土０．００２?０．０３４±０．００１?０．０５８±０．００２??实验组?０．００８±０．００３?０．０１６土０．００１?０．０２０士０．００１?０．０２９±０．００５??／?值?１０．４９１?１０．１９７?２６．５６１?２８．１０５??尸值?０．００１?０．００１?０．００１?０．００１??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路在脂肪干细胞向神经元分化过程中的作用[J]. 姬文晨,蒋婉婷,冯娇,李萌. 西安交通大学学报(医学版). 2017(06)
[2]Wnt和Notch通路在老龄个体骨髓间充质干细胞成骨中的调控[J]. 张建康,卫俊俊,唐曌隆,余云波,敬伟. 国际口腔医学杂志. 2017(04)
[3]慢性牙周炎中肿瘤坏死因子ɑ对骨髓间充质干细胞成骨分化的调控作用[J]. 李晓光,王一珠,郭斌. 华西口腔医学杂志. 2017(03)
[4]TNF-α对鼠根尖乳头干细胞增殖及多向分化能力的影响[J]. 曹蓉蓉,马俊玥,李淑慧,马玉,吴佩玲. 重庆医学. 2017(14)
[5]脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究[J]. 舒雄,郑蕊,杰永生,陈磊,靳少锋,綦惠,孙磊. 中国医药生物技术. 2017(02)
[6]人瘢痕疙瘩间充质样干细胞向成骨细胞分化过程中Notch信号表达的研究[J]. 梁钦博,邓呈亮,魏在荣,王波,张文夺,王达利. 中国美容整形外科杂志. 2017(02)
[7]Wnt/β-catenin信号通路在调控骨量的作用[J]. 李俊峰,郭庆山,傅捷辉,宗兆文. 重庆医学. 2017(03)
[8]骨生物材料复合骨髓间充质干细胞异位成骨修复肋骨大段缺损[J]. 王俊钢,李聪聪,毛广显,张洁,杨翠. 中国组织工程研究. 2017(02)
[9]牙周膜干细胞聚合体:一种潜在骨组织再生方法[J]. 董洪宇,马淑芳,那思家. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2017(01)
[10]Notch和Wnt信号通路在自体骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白修复兔牙槽骨缺损中的表达[J]. 周春梅,李淑慧,温齐古丽·乃库力,于莉,袁萍,赵璐,吴佩玲,尼加提·吐尔逊. 华西口腔医学杂志. 2016(02)
博士论文
[1]TNF-α对牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化及骨创伤修复影响的研究[D]. 黄海云.山东大学 2012
[2]炎症微环境影响下Wnt信号通路对牙周膜干细胞骨向分化的调控机制研究[D]. 刘娜.第三军医大学 2011
硕士论文
[1]低氧对人牙髓干细胞生物学特性的影响[D]. 刘庆娜.南方医科大学 2015
[2]DLL1在BMP9诱导MSCs成骨分化的作用及机制研究[D]. 杨伦韵.重庆医科大学 2015
[3]成骨细胞应力学效应中Notch信号及其关键因子APH1作用机制的研究[D]. 李欣.山东大学 2013
本文编号：3395738
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
流式细胞仪细胞表型鉴定结果
原代ＰＤＬＳＣｓ培养至第３天可见有细胞从组织边缘爬出（附录图１），继续培养??至第８天组织周围细胞汇合至８０％？９０％时，即可传代，细胞传至第３代时细胞轮??廓清晰，形态单一，均呈长梭型，生长状态良好（附录图２）。??２?ＰＤＬＳＣｓ流式分子鉴定??流式细胞鉴定ＰＤＬＳＣｓ的结果，从左至右依次为ＣＤ１０５ＣＤ３１；?ＣＤ９０ＣＤ４５；??ＣＤ１４６；?ＢＬＡＮＫ，其中ＣＤ１０５和ＣＤ９０阳性率为９０％及９５．６％，ＣＤ１４６阳性率为??１７°／。，ＣＤ３１?及?ＣＤ４５?阳性率为?０．６％及?０．７％?（图?１?）。??：，．，Ｕ：．．．．．晨—，－氣」???Ｍ｜?１０＊０１０＊?１０＊?１０＊?ｔｏ＊?ｆ?＾?〇?１０２?｜〇３?１０＊?｜〇＊?Ｄ?？〇ａ?ｌｆｌＪ?＼０＊?１０＊?０?Ｉｆｔ＊?ｔｏＪ?！０＊?１０＊??图１流式细胞仪细胞表型鉴定结果??Ｆｉｇ．ｌ?Ｃｅｌｌ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＦＡＣＳ??３?ＰＤＬＳＣｓ实验组与对照组细胞增殖能力比较??连续７天的ＣＣＫ－８实验结果显示（表３、图２），ｗｊ？以看出细胞经历了潜伏期，快??速生长期，缓慢生长期，第１？３ｄ为潜伏期，４？５?ｄ为快速生长期，细胞数量呈对数??增长
成骨诱导液连续培养２１天后，茜素红染色显示实验组与对照组均有矿化结节生??成，与实验组（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）相比，对照组（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ｏｃ）矿化结节染色较深、??数量多且形成的范围较广泛（附录图３），而实验组（ｌＯｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）结节染色浅、??数量少且范围较小（附录图４）。??４．?２?ＡＬＰ活性检测实验结果比较??实验组与对照组分别于１、３、５、７天，终止矿化，分别检测ＡＬＰ活性，结果显??示（表４、图３），实验组ＰＤＬＳＣｓ与对照组ＰＤＬＳＣｓ?ＡＬＰ活性均逐渐增加，同时实验??组（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓＡＬＰ表达明显低于对照组（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓ，??差异具有统计学意义〇Ｐ＜〇．〇５）。??表４实验组与对照组碱性磷酸酶的活性（ＯＤ，无±ｘ）??Ｔａｂｌｅ?４?Ａｌｋａｌｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＰＤＬＳＣｓ?ｉｎ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ??（ＯＤ，?ｘ±ｓ）??培养时间（天／ｄ）??组别????１３?５?７??对照组?０．０１２土０．００１?０．０１７土０．００２?０．０３４±０．００１?０．０５８±０．００２??实验组?０．００８±０．００３?０．０１６土０．００１?０．０２０士０．００１?０．０２９±０．００５??／?值?１０．４９１?１０．１９７?２６．５６１?２８．１０５??尸值?０．００１?０．００１?０．００１?０．００１??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路在脂肪干细胞向神经元分化过程中的作用[J]. 姬文晨,蒋婉婷,冯娇,李萌. 西安交通大学学报(医学版). 2017(06)
[2]Wnt和Notch通路在老龄个体骨髓间充质干细胞成骨中的调控[J]. 张建康,卫俊俊,唐曌隆,余云波,敬伟. 国际口腔医学杂志. 2017(04)
[3]慢性牙周炎中肿瘤坏死因子ɑ对骨髓间充质干细胞成骨分化的调控作用[J]. 李晓光,王一珠,郭斌. 华西口腔医学杂志. 2017(03)
[4]TNF-α对鼠根尖乳头干细胞增殖及多向分化能力的影响[J]. 曹蓉蓉,马俊玥,李淑慧,马玉,吴佩玲. 重庆医学. 2017(14)
[5]脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究[J]. 舒雄,郑蕊,杰永生,陈磊,靳少锋,綦惠,孙磊. 中国医药生物技术. 2017(02)
[6]人瘢痕疙瘩间充质样干细胞向成骨细胞分化过程中Notch信号表达的研究[J]. 梁钦博,邓呈亮,魏在荣,王波,张文夺,王达利. 中国美容整形外科杂志. 2017(02)
[7]Wnt/β-catenin信号通路在调控骨量的作用[J]. 李俊峰,郭庆山,傅捷辉,宗兆文. 重庆医学. 2017(03)
[8]骨生物材料复合骨髓间充质干细胞异位成骨修复肋骨大段缺损[J]. 王俊钢,李聪聪,毛广显,张洁,杨翠. 中国组织工程研究. 2017(02)
[9]牙周膜干细胞聚合体:一种潜在骨组织再生方法[J]. 董洪宇,马淑芳,那思家. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2017(01)
[10]Notch和Wnt信号通路在自体骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白修复兔牙槽骨缺损中的表达[J]. 周春梅,李淑慧,温齐古丽·乃库力,于莉,袁萍,赵璐,吴佩玲,尼加提·吐尔逊. 华西口腔医学杂志. 2016(02)
博士论文
[1]TNF-α对牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化及骨创伤修复影响的研究[D]. 黄海云.山东大学 2012
[2]炎症微环境影响下Wnt信号通路对牙周膜干细胞骨向分化的调控机制研究[D]. 刘娜.第三军医大学 2011
硕士论文
[1]低氧对人牙髓干细胞生物学特性的影响[D]. 刘庆娜.南方医科大学 2015
[2]DLL1在BMP9诱导MSCs成骨分化的作用及机制研究[D]. 杨伦韵.重庆医科大学 2015
[3]成骨细胞应力学效应中Notch信号及其关键因子APH1作用机制的研究[D]. 李欣.山东大学 2013
本文编号：3395738
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