环二鸟苷酸对巨噬细胞极化及促炎作用的体外研究
发布时间：2021-09-15 14:08
背景:牙周炎是以牙周结缔组织破坏和牙槽骨吸收为主要特征的一种常见的口腔慢性免疫炎症性疾病,其患病率高达80%90%,是我国成人丧失牙齿的主要原因之一。牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）作为牙周炎的主要致病菌,在其侵袭牙周组织后能够诱导大量吞噬细胞聚集,引起炎症反应的发生,进而导致牙周结缔组织破坏和牙槽骨吸收。Pg菌定植牙周组织后释放一种环二鸟苷酸（cyclic diguanylate,c-di-GMP）的物质,其通常存在于革兰氏阴性菌中,充当于细菌的第二信使,能够将受体信号从细胞表面转移到真核细胞的细胞质或细胞核中的一种靶分子。它是细胞信号转导级联的一部分,能够将初始信号扩增数倍从而对细胞内的生化反应产生巨大作用。在牙周组织破坏的过程中,免疫炎症反应发挥着重要作用,作为机体固有免疫系统的重要组成部分——巨噬细胞,势必参与其中。在促炎或抗炎的微环境下,巨噬细胞可分化为两种不同类型,即M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,此过程称为巨噬细胞极化。巨噬细胞的极化过程在对机体抵抗病原体感染及组织的修复过程中发挥重要作用。因此,推测c-di-...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
环二核苷酸在胞质内作用机制的模式图
A、B：未经 c-di-GMP 刺激 (×40, ×100)；C、D：C-di-GMP 刺激细胞 24 小时 (×40, ×100)。图 1：C-di-GMP 刺激 RAW 264.7 细胞 24 小时后 RAW264.7 细胞形态变化Fig. 1: Variation of RAW264.7 cell morphology stimulated by c-di-GMP for 24 h.RAW264.7 细胞系与 50 μg/mL c-di-GMP 共同培养 24 小时后光学显微镜下观察到阴性对照组(即 c-di-GMP 浓度为 0μg/mL)细胞形态以类圆形为主，伴有不规则多边形，少量细胞有伪足（如图 1A、B）；而受到 c-di-GMP 刺激的 RAW264.7细胞呈长梭型，伸出大量伪足，且细胞铺展面积明显增大（如图 1C、D）。3.2 实时定量 PCR 结果在 LPS 等外界微环境因素的改变下下，巨噬细胞可以发生活化，释放大量的炎症因子，介导炎症的固有免疫应答。而巨噬细胞的极化，即是巨噬细胞不同活化状态的体现。为了探讨 c-di-GMP 对巨噬细胞极化的影响，我们首先观测c-di-GMP 对巨噬细胞刺激后牙周炎相关的炎症因子表达的差异。将不同浓度(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的 c-di-GMP 与 RAW 264.7
A~C：依次为 IL-1 β、IL-6 和 TNF-α 检测结果；与对照组相比，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001图 2：不同浓度 c-di-GMP 刺激 RAW 264.7 细胞 24 h 后炎症因子的基因表达情况Fig. 2: The inflammatory cytokines genes expression of different concentration c-di-GMPcocultured with RAW 264.7 for 24 h.为了进一步明确 c-di-GMP 能促进巨噬细胞发生 M1 型极化的猜想，我们采用相同的分组检测了 M1 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-23、iNOS 及 M2 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-10 的 mRNA 表达水平的改变。M1 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-23、iNOS 的 mRNA 表达水平与各组 c-di-GMP 浓度水平呈正相关，10μg/mL、50μg/mL 浓度组各基因的表达水平均明显高于阴性对照组（如图3A、B）。M2 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-10 的 mRNA 表达水平在各浓度组中的表达水平无显著升高，与阴性对照组相比表达量基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)(如图 3C)。
本文编号：3396219
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
环二核苷酸在胞质内作用机制的模式图
A、B：未经 c-di-GMP 刺激 (×40, ×100)；C、D：C-di-GMP 刺激细胞 24 小时 (×40, ×100)。图 1：C-di-GMP 刺激 RAW 264.7 细胞 24 小时后 RAW264.7 细胞形态变化Fig. 1: Variation of RAW264.7 cell morphology stimulated by c-di-GMP for 24 h.RAW264.7 细胞系与 50 μg/mL c-di-GMP 共同培养 24 小时后光学显微镜下观察到阴性对照组(即 c-di-GMP 浓度为 0μg/mL)细胞形态以类圆形为主，伴有不规则多边形，少量细胞有伪足（如图 1A、B）；而受到 c-di-GMP 刺激的 RAW264.7细胞呈长梭型，伸出大量伪足，且细胞铺展面积明显增大（如图 1C、D）。3.2 实时定量 PCR 结果在 LPS 等外界微环境因素的改变下下，巨噬细胞可以发生活化，释放大量的炎症因子，介导炎症的固有免疫应答。而巨噬细胞的极化，即是巨噬细胞不同活化状态的体现。为了探讨 c-di-GMP 对巨噬细胞极化的影响，我们首先观测c-di-GMP 对巨噬细胞刺激后牙周炎相关的炎症因子表达的差异。将不同浓度(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的 c-di-GMP 与 RAW 264.7
A~C：依次为 IL-1 β、IL-6 和 TNF-α 检测结果；与对照组相比，*：P<0.05，**：P<0.01，***：P<0.001图 2：不同浓度 c-di-GMP 刺激 RAW 264.7 细胞 24 h 后炎症因子的基因表达情况Fig. 2: The inflammatory cytokines genes expression of different concentration c-di-GMPcocultured with RAW 264.7 for 24 h.为了进一步明确 c-di-GMP 能促进巨噬细胞发生 M1 型极化的猜想，我们采用相同的分组检测了 M1 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-23、iNOS 及 M2 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-10 的 mRNA 表达水平的改变。M1 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-23、iNOS 的 mRNA 表达水平与各组 c-di-GMP 浓度水平呈正相关，10μg/mL、50μg/mL 浓度组各基因的表达水平均明显高于阴性对照组（如图3A、B）。M2 型巨噬细胞极化相关细胞因子 IL-10 的 mRNA 表达水平在各浓度组中的表达水平无显著升高，与阴性对照组相比表达量基本一致，差异无统计学意义(P>0.05)(如图 3C)。
本文编号：3396219
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