巯基蛋白酶水解β-酪蛋白/茶黄素复合膜的研究
发布时间：2021-09-24 10:44
目的：考察三种巯基蛋白酶（木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶）水解去磷酸化的牛乳β-酪蛋白（dephosphorylated bovine milk β-casein, β-CN（DP））/茶黄素（theaflavin, TF）复合膜的效率及水解后残存膜再次吸附TF的能力。方法：在消散因子石英微天平（quartz crystal microbalance with dissipation, QCM-D）芯片表面自组装单分子β-CN（DP）膜并在其上吸附TF，建立β-CN（DP）/TF复合膜。向QCM-D测量池中分别通入木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，观察膜水解的时间（Δt）与频率改变（ΔF）图形。运用玻尔兹曼方程对ΔF和Δt进行拟合，求得水解效率（1/C），比较不同酶水解复合膜的效率之间的差异。通过原子力显微镜和接触角测量仪表征水解前后复合膜的均方根粗糙度、形貌和亲疏水性。对不同酶水解后的残存膜行再次吸附TF实验，并与膜首次吸附TF的相关参数（Δm、Δh）比较。结果：弗伦德利希等温线则更好地描述TF在β-CN（DP）膜表面的吸附行为。三种酶的水解效率为无花果蛋白酶>木瓜蛋...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
茶黄素结构Fig.1Thestructureoftheaflavin
图 2 消散因子石英晶体微天平工作原理Fig.2 The operating principle of QCM-D原子力显微镜（AFM）的工作原理[34]1986年Binnig等人在扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope, STM）的基础上发明了新型扫描探针显微镜—原子力显微镜（atomic force microscope,AFM），它利用原子之间的范德华力来呈现样品的表面特性，可获取纳米级分辨率的活生物体等表面结构信息。原子力显微镜的基本原理是：将一个对微弱力极敏感的微悬臂一端固定，另一端有一微小的针尖，针尖与样品表面轻轻接触，由于针尖尖端原子与样品表面原子间存在极微弱的排斥力，通过在扫描时控制这种力的恒定，带有针尖的微悬臂将对应于针尖与样品表面原子间作用力的等位面而在垂直于样品的表面方向起伏运动。利用光学检测法或隧道电流检测法，可测得微悬臂对应于扫描各点的位置变化，从而可以获得样品表面形貌的信息。它不受样品是否具有导电性的限制，可以对导体、半导体和绝缘体进行测量，因此 AFM
若样品表面柔软而无法承受，则不宜选用接触模式检测样品表成像。非接触模式探测样品表面时，悬臂在距离样品表面上方 5～10 nm 的处振荡。这时，样品与针尖之间的相互作用由范德华力控制，通常为 10-12会破坏样品，也不会被污染针尖，特别适合于研究非刚性物体的表面。敲击介于接触模式和非接触模式之间，悬臂在试样表面上方以其共振频率振荡，仅仅是周期性地短暂地接触/敲击样品表面。这就意味着针尖接触样品时所的侧向力被明显地减小了。因此，当检测非刚性样品时，AFM 的敲击模式好的选择之一。AFM的相位成像技术可以在纳米尺度上获得样品表面局域性质的丰富，是通过检测驱动微悬臂探针振动的信号源的相位角与微悬臂探针实际振动位角之差（即两者的相移）的变化来成像的。引起相移的因素很多，如样品分、硬度、粘弹性质等。在相位图中，相同的颜色代表相同的材质和高度。原理如图3所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较[J]. 曲和之,黄露,张国华,柴智,张雷,郝东云,王晓平. 吉林大学学报(理学版). 2008(06)
[2]Ca2+和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响[J]. 王晓敏,刘智均,胡秀沂,黄惠华. 现代食品科技. 2008(09)
[3]菠萝蛋白酶的研究及应用进展[J]. 吴茂玉,马超,乔旭光,宋烨,赵岩. 食品科技. 2008(08)
[4]Purification and Characterization of a Proteolytic Enzyme from Fig Latex[J]. HUANG Lu, QU He-zhi, ZHANG Lei, DU Shan-shan, YANG Shuo, HAO Dong-yun and WANG Xiao-ping* Key Laboratory of Molecular Enzymology & Engineering of Ministry of Educational Jilin University, Changchun 130021, P. R. China. Chemical Research in Chinese Universities. 2008(03)
[5]聚乙二醇对菠萝蛋白酶的化学修饰[J]. 田国贺,郭佳宓,吕团伟,郑菁婧,范豪,滕利荣. 生物技术. 2006(01)
[6]菠萝蛋白酶的药用功能及其在畜牧业的应用前景[J]. 林晨,李诺,韩琦. 中国畜牧兽医. 2005(01)
[7]菠萝蛋白酶肠溶片与抗生素合用治疗慢性前列腺炎[J]. 庞然. 现代医药卫生. 2004(09)
[8]菠萝蛋白酶应用的性质研究[J]. 章佩芬,陈敏华,郭利平. 广州食品工业科技. 2002(02)
[9]菠萝蛋白酶的保存稳定性研究[J]. 章佩芬,郭勇. 药物生物技术. 2002(03)
[10]菠萝蛋白酶的研究与应用进展[J]. 章佩芬,郭勇,罗焕敏. 华西药学杂志. 2002(02)
本文编号：3407617
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
茶黄素结构Fig.1Thestructureoftheaflavin
图 2 消散因子石英晶体微天平工作原理Fig.2 The operating principle of QCM-D原子力显微镜（AFM）的工作原理[34]1986年Binnig等人在扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope, STM）的基础上发明了新型扫描探针显微镜—原子力显微镜（atomic force microscope,AFM），它利用原子之间的范德华力来呈现样品的表面特性，可获取纳米级分辨率的活生物体等表面结构信息。原子力显微镜的基本原理是：将一个对微弱力极敏感的微悬臂一端固定，另一端有一微小的针尖，针尖与样品表面轻轻接触，由于针尖尖端原子与样品表面原子间存在极微弱的排斥力，通过在扫描时控制这种力的恒定，带有针尖的微悬臂将对应于针尖与样品表面原子间作用力的等位面而在垂直于样品的表面方向起伏运动。利用光学检测法或隧道电流检测法，可测得微悬臂对应于扫描各点的位置变化，从而可以获得样品表面形貌的信息。它不受样品是否具有导电性的限制，可以对导体、半导体和绝缘体进行测量，因此 AFM
若样品表面柔软而无法承受，则不宜选用接触模式检测样品表成像。非接触模式探测样品表面时，悬臂在距离样品表面上方 5～10 nm 的处振荡。这时，样品与针尖之间的相互作用由范德华力控制，通常为 10-12会破坏样品，也不会被污染针尖，特别适合于研究非刚性物体的表面。敲击介于接触模式和非接触模式之间，悬臂在试样表面上方以其共振频率振荡，仅仅是周期性地短暂地接触/敲击样品表面。这就意味着针尖接触样品时所的侧向力被明显地减小了。因此，当检测非刚性样品时，AFM 的敲击模式好的选择之一。AFM的相位成像技术可以在纳米尺度上获得样品表面局域性质的丰富，是通过检测驱动微悬臂探针振动的信号源的相位角与微悬臂探针实际振动位角之差（即两者的相移）的变化来成像的。引起相移的因素很多，如样品分、硬度、粘弹性质等。在相位图中，相同的颜色代表相同的材质和高度。原理如图3所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较[J]. 曲和之,黄露,张国华,柴智,张雷,郝东云,王晓平. 吉林大学学报(理学版). 2008(06)
[2]Ca2+和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响[J]. 王晓敏,刘智均,胡秀沂,黄惠华. 现代食品科技. 2008(09)
[3]菠萝蛋白酶的研究及应用进展[J]. 吴茂玉,马超,乔旭光,宋烨,赵岩. 食品科技. 2008(08)
[4]Purification and Characterization of a Proteolytic Enzyme from Fig Latex[J]. HUANG Lu, QU He-zhi, ZHANG Lei, DU Shan-shan, YANG Shuo, HAO Dong-yun and WANG Xiao-ping* Key Laboratory of Molecular Enzymology & Engineering of Ministry of Educational Jilin University, Changchun 130021, P. R. China. Chemical Research in Chinese Universities. 2008(03)
[5]聚乙二醇对菠萝蛋白酶的化学修饰[J]. 田国贺,郭佳宓,吕团伟,郑菁婧,范豪,滕利荣. 生物技术. 2006(01)
[6]菠萝蛋白酶的药用功能及其在畜牧业的应用前景[J]. 林晨,李诺,韩琦. 中国畜牧兽医. 2005(01)
[7]菠萝蛋白酶肠溶片与抗生素合用治疗慢性前列腺炎[J]. 庞然. 现代医药卫生. 2004(09)
[8]菠萝蛋白酶应用的性质研究[J]. 章佩芬,陈敏华,郭利平. 广州食品工业科技. 2002(02)
[9]菠萝蛋白酶的保存稳定性研究[J]. 章佩芬,郭勇. 药物生物技术. 2002(03)
[10]菠萝蛋白酶的研究与应用进展[J]. 章佩芬,郭勇,罗焕敏. 华西药学杂志. 2002(02)
本文编号：3407617
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