ENO1对肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子的调控在OSCC中的作用及机制
发布时间：2021-10-05 03:06
研究目的:口腔鳞状细胞癌被世界卫生组织提为,世界排名第六的恶性肿瘤,作为易发肿瘤,因侵袭性强、转移率高的特点,导致其患者预后极差甚至危及生命。近年来,对于侵入邻近组织、发生转移的口腔鳞状细胞癌患者的死亡率尚无显著改善[1]。所以亟需进一步研究口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的机制,以延长患者的生存期。肿瘤相关巨噬细胞作为肿瘤微环境中的主要免疫细胞亚群之一,在肿瘤微环境中主要极化为两种表型,M1型和M2型。其中M2型肿瘤相关巨噬细胞可以促进肿瘤的侵袭和转移,另外,肿瘤相关巨噬细胞通过分泌多种细胞因子,如IL-6、IL-10、IL-12等也可以影响肿瘤的生长、侵袭和转移[2]。研究表明ENO1是糖酵解过程中的一种α-烯醇化酶,是催化糖酵解途径中2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇丙酮酸的金属酶。它是一种多功能糖酵解酶,参与各种重要的生理过程,如细胞应激、癌症的发生和转移[3]。研究发现ENO1在口腔鳞状细胞癌组织和细胞上高表达,并且可以通过糖酵解产生的ATP促进肿瘤的侵袭转移,抑制肿瘤的进一步发展,但ENO1在口腔鳞状细胞癌的具体机制尚未完...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
siRNA转染CAL27细胞后ENO1的表达
第3章实验结果23重复3次；**，P<0.01；***，P<0.001。使用ENO1的siRNA转染CAL27细胞36h提取总RNA，进行Real-timePCR检测基因表达水平，另一组实验转染进行48h后，提取蛋白进行Westernblot检测ENO1蛋白表达水平。实验结果如图所示：与对照组相比，基因水平显示，在CAL27细胞中siRNA1、siRNA2、siRNA3的表达量下降约65%左右；蛋白水平显示，在CAL27细胞中siRNA1、siRNA2的表达量下降约40%、30%。该组实验结果表明，siRNA下调CAL27细胞的ENO1的表达成功。且siRNA1号效率最高，该实验后续均使用siRNA1干扰CAL27细胞的ENO1的表达。3.3转染ENO1的siRNA后对CAL27细胞侵袭的影响NCsiRNA图3.3CAL27细胞转染siRNA后对其侵袭的影响Fig.3.3EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAontheirinvasionability注：每次实验独立重复3次；***，P<0.001。上室铺胶后，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前加入siRNA转染的CAL27细胞上清诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共作用48h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与NC组相比，转染siRNA组CAL27细胞穿过小室的数量明显减少（***，P<0.001），实验结果说明，ENO1的表达降低后，可以显著减弱CAL27细胞的侵袭能力。
第3章实验结果243.4转染ENO1的siRNA后对CAL27细胞转移的影响NCsiRNA图3.4CAL27细胞转染siRNA后对其转移的影响Fig.3.4EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAonitsmigration注：每次实验独立重复3次；**，P<0.01。上室不处理，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前加入siRNA转染的CAL27细胞上清诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共作用24h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与NC组相比，转染siRNA组CAL27细胞穿过小室的数量明显减少（**，P<0.01），结果说明，ENO1的表达降低后，可以显著减弱CAL27细胞的转移能力。3.5外源性ENO1蛋白对CAL27细胞侵袭的影响ControlENO1图3.5外源性ENO1蛋白对CAL27细胞侵袭的影响Fig.3.5EffectofENO1ontheinvasiveabilityofOSCC注：每次实验独立重复3次；**，P<0.01。上室铺胶后，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前用CAL27细胞上清加入外源性ENO1蛋白诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共同作用48h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与Control组比较，加入外源性重组ENO1蛋白组，CAL27细胞穿过小室的数量明显增多（**，P<0.01），结果说明，ENO1的表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA在肿瘤免疫中的作用：对肿瘤相关巨噬细胞的功能调控（英文）[J]. Chong CHEN,Jia-ming LIU,Yun-ping LUO. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2020(01)
本文编号：3418877
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
siRNA转染CAL27细胞后ENO1的表达
第3章实验结果23重复3次；**，P<0.01；***，P<0.001。使用ENO1的siRNA转染CAL27细胞36h提取总RNA，进行Real-timePCR检测基因表达水平，另一组实验转染进行48h后，提取蛋白进行Westernblot检测ENO1蛋白表达水平。实验结果如图所示：与对照组相比，基因水平显示，在CAL27细胞中siRNA1、siRNA2、siRNA3的表达量下降约65%左右；蛋白水平显示，在CAL27细胞中siRNA1、siRNA2的表达量下降约40%、30%。该组实验结果表明，siRNA下调CAL27细胞的ENO1的表达成功。且siRNA1号效率最高，该实验后续均使用siRNA1干扰CAL27细胞的ENO1的表达。3.3转染ENO1的siRNA后对CAL27细胞侵袭的影响NCsiRNA图3.3CAL27细胞转染siRNA后对其侵袭的影响Fig.3.3EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAontheirinvasionability注：每次实验独立重复3次；***，P<0.001。上室铺胶后，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前加入siRNA转染的CAL27细胞上清诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共作用48h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与NC组相比，转染siRNA组CAL27细胞穿过小室的数量明显减少（***，P<0.001），实验结果说明，ENO1的表达降低后，可以显著减弱CAL27细胞的侵袭能力。
第3章实验结果243.4转染ENO1的siRNA后对CAL27细胞转移的影响NCsiRNA图3.4CAL27细胞转染siRNA后对其转移的影响Fig.3.4EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAonitsmigration注：每次实验独立重复3次；**，P<0.01。上室不处理，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前加入siRNA转染的CAL27细胞上清诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共作用24h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与NC组相比，转染siRNA组CAL27细胞穿过小室的数量明显减少（**，P<0.01），结果说明，ENO1的表达降低后，可以显著减弱CAL27细胞的转移能力。3.5外源性ENO1蛋白对CAL27细胞侵袭的影响ControlENO1图3.5外源性ENO1蛋白对CAL27细胞侵袭的影响Fig.3.5EffectofENO1ontheinvasiveabilityofOSCC注：每次实验独立重复3次；**，P<0.01。上室铺胶后，用5%血清的培养基孵育的CAL27细胞，实验组下室RAW264.7细胞提前用CAL27细胞上清加入外源性ENO1蛋白诱导，然后更换为10%血清的培养基。上室和下室共同作用48h后，对细胞进行固定染色，计数。实验结果显示：与Control组比较，加入外源性重组ENO1蛋白组，CAL27细胞穿过小室的数量明显增多（**，P<0.01），结果说明，ENO1的表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA在肿瘤免疫中的作用：对肿瘤相关巨噬细胞的功能调控（英文）[J]. Chong CHEN,Jia-ming LIU,Yun-ping LUO. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2020(01)
本文编号：3418877
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