抗菌/抗内毒素多肽葛佬素的表达、纯化及其生物活性的初步研究

发布时间：2021-10-06 16:23

　　牙髓炎是口腔最常见的疾病之一，研究表明感染性牙髓炎主要的致病菌是G^-菌，而内毒素（lipopolysaccharide,LPS）是主要的毒力因子。实验研究发现，LPS能诱导单核-巨噬细胞、成纤维细胞等细胞分泌多种炎症细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8等，产生炎症级联反应，导致血管通透性增加、牙髓腔内渗液增多、髓腔压力增大，从而引起牙髓炎症状。因此研究拮抗LPS的治疗措施，降低LPS对牙髓细胞的毒性作用，对牙髓炎的防治和活髓的保存具有重要意义。 葛佬素（Gloverin）是一种存在于蚕蛹中的抗菌肽，分子量为13.8KD。该蛋白可结合LPS，阻断LPS的生物学效应，是一种具有杀灭G^-菌、中和LPS双重作用的抗菌肽。虽然本实验室前期将葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中进行了表达，同时证明该表达产物具有杀灭大肠杆菌J5的作用，但是由于葛佬素在COS-7细胞中表达量还很低，远不能满足科研及临床应用的需要，因此利用原核表达系统表达具有生物活性的重组葛佬素多肽，成为获得大量葛佬素以及进一步研究其生物学效应的一种选择。 本研究目的即在采用基... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

以质粒pBzHG为模板扩增葛佬素基因1.PCRmarker;2PCRfragmentofGloverin.

琼脂糖凝胶电泳，结果表明重组子由两条分子量约为390bp及3530bp的DNA片段构成，符合目的DNA及载体片段分子量的大小，提示为阳性重组质粒(图2)。23353DbP39ObP图2重组质粒的酶切鉴定l入DNA/Hindlllmarker;2PCRmarker;3Plasmidsdouble一digestedbySrnal+Neol;F192IdentificationofthePlasmidbyrestrietionenzymedigestion29

PIVEX2.3表达对照组，在14KD附近未见明显的蛋白条带，提示PIVEX2.3一G组的RTS500表达产物中含有有大量的与葛佬素蛋白分子量一致的蛋白。(图4)239740066200427003100014400图4葛佬素蛋白的体外表达1standardproteinmarkers;2PIVEX2.3一G:3negativeeontrol(PIVEX2.3)Fig4ExPressionofrecombinantgloverinbyRTS50O

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3420357