顺铂通过Notch4信号通路增强口腔鳞癌干细胞的自我更新能力

发布时间：2021-10-26 17:15

　　目的:研究Notch4信号通路对口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）自我更新能力的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库分析Notch4基因在头颈部肿瘤中的表达。2μmol/L顺铂处理口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞48 h,再加入Notch通路抑制剂DAPT作用24 h,采用流式细胞术检测CSC比例,Western blotting法和qPCR法检测CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4信号通路中的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4等）的表达。采用siRNA技术敲降Notch4,Western blotting法和q PCR法检测si-Notch4和顺铂对CSC标志物表达水平的影响,干细胞成球实验检测CSC的自我更新能力。结果:头颈部肿瘤组织中Notch4基因呈高表达（P=0.046）。顺铂处理后,PJ15和PJ41细胞中NICD4和CSC标志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4信号通路的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、H... 

【文章来源】：中国肿瘤生物治疗杂志. 2020,27(05)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

不同浓度顺铂作用48 h对PJ15、PJ41细胞活力的影响

图5 DAPT下调PJ15和PJ41 CSC特异性标志物和Notch通路下游基因的表达为了进一步阐明Notch4信号通路对口腔鳞癌干细胞自我更新的作用，我们进行了验证肿瘤干细胞增殖能力的成球实验。结果（图6C）显示，与对照组相比，si-Notch4组PJ15细胞[（1.33±0.47)vs(8.00±0.82）个，P<0.01]和PJ41细胞[（1.00±0.82)vs(7.67±1.25）个，P<0.01]球体的数量和大小均显著低于对照组，提示Notch4信号通路可以调控CSC的自我更新。

为验证Notch4信号通路在口腔鳞癌干细胞中的作用，敲降Notch4后加入2μmol/L DDP作用24 h,WB实验检测结果（图6A）显示，si-Notch4组与对照组相比，CSC特异性基因Nanog和Bmi-1表达量无显著差异。流式细胞术检测结果（图6B）显示，si-Notch4组中CSC比例升高幅度小于对照组，这进一步提示Notch4信号通路参与了CSC的自我更新。图3 使用TCGA数据集比较Notch通路相关基因在正常组与肿瘤组间的表达情况


本文编号：3459890