人CEA基因疫苗的构建及其在舌癌细胞株中的表达

发布时间：2021-10-30 16:24

　　目的（1）克隆人癌胚抗原（carcinoembryonic antigen）基因片段,构建pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）检测其在人舌癌Tca8113细胞株（human tongue squamous cell carcinoma cell line8113,Tca8113）中的表达。方法（1）采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术,从人结肠癌组织中扩增出人CEA基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,构建成pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）通过用酶切、PCR扩增电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。（3）转染人舌癌Tca8113细胞,以转染空载体组做实验对照组,以未转染的舌癌细胞作空白对照组,通过RT-PCR和免疫组化检测其在人舌癌Tca8113细胞中的表达。结果（1）经酶切、PCR扩增电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人CEA-cDNA。（2）经RT-PCR和免疫组化证实:与实验对照组和空白对照组相比较,转染pcDNA3.1-CEA后的人舌癌Tca8113细胞内CEA mRNA的转录和蛋白... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

总RNA电泳

1 2 DL2000CEA 真核表达载体的鉴定pcDNA3.1-CEA的酶切电泳鉴定:粒经EcoRI\XhoI双酶切电泳后,出现了2.1kbpEAcDNA产物，5.4kbp为pcDNA3.1线状质粒图2 RT-PCR产物电泳质量 DL2000 Marker，1 为扩增的特异条带(2.1kbp)，2 为阴

3.1 重组质粒pcDNA3.1-CEA的酶切电泳鉴定:重组质粒经EcoRI\XhoI双酶切电泳后,出现了2.1kbp和5.4kbp两条带（2.1kbp为CEAcDNA产物，5.4kbp为pcDNA3.1线状质粒）(图3)。1 2 3 4 5 6图 3.1 重组质粒 pcDNA3.1-CEA 双酶切电泳图谱图2 RT-PCR产物电泳M 为相对分子质量 DL2000 Marker，1 为扩增的特异条带(2.1kbp)，2 为阴性对照图3 重组质粒pcDNA3.1- CEA双酶切电泳1 为相对分子质量 1kbp DNA Ladder Marker，2、3、4、5、6 为双酶切产物5.4kb(pcDNA3.1)和 2.1kb（CEA）1000bp750bp500bp2.1kbp10000bp6000bp2000bp1500bp1000bp5

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3467050