CaMKⅡδ基因沉默对c-fos、c-jun、CREB表达及破骨细胞分化的影响
发布时间：2021-11-03 03:57
目的 探索钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ（CaMKⅡδ）基因沉默对破骨细胞分化、骨吸收功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法 1、CaMKⅡδRNA干扰效率的测定。构建CaMKⅡδ RNA干扰载体;将小鼠RAW264.7细胞分为空白组、阴性载体组和干扰载体组;后两组细胞分别转染阴性载体病毒和干扰载体病毒;病毒转染12h后,换新鲜完全培养基,加入核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）诱导;5天后收获细胞,提三组细胞的RNA进行Real-time PCR检测CaMKⅡδ的mRNA表达水平,提取三组细胞总蛋白进行Western-blotting检测CaMKⅡδ蛋白水平。2、TRAP染色检测沉默CaMKⅡ δ基因对破骨细胞分化的影响,牛骨吸收陷窝检测沉默CaMKⅡδ对破骨细胞吸收功能的影响。方法是使用慢病毒分别转染阴性载体组、干扰载体组12小时,之后用50ng/ml RANKL诱导5天后收获,并完成上述检测。3、CaMKⅡδ基因沉默对c-fos、c-jun、CREB表达的影响。细胞处理方法同前,RANKL诱导...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RAW264.7细胞（倒置相差显微镜，×100）
第 1 章 实验研究mRNA 相对表达水平分别为 1.282±0.234、0.950±0.275、0.377±0.148（（表 3）；空白组与阴性载体组之间无显著性差异（P>0.05），而干扰载白组下降了 70.6%（P<0.01），即 mRNA 干扰效率为 70.6 %（图 2）。表 3 定量分析三组细胞中 CaMKⅡδ mRNA 表达水平 （n=3, x ± s）Table3 Quantitative analysis of CaMKⅡδ mRNA level among the three grouby Real-time PCR（n=3, x ± s）组别 平均相对浓度 F 空白组阴性载体组干扰载体组1.282±0.2340.950±0.2750.377±0.14812.341
图 3 Western-blotting 检测各组细胞 CaMKg.3 Detection of CaMKⅡδ protein in cells amongIIδ基因沉默对破骨细胞生成及吸收功能的胞，观察三组均出现了阳性的多核破骨细较多、体积较大的是空白组和阴性载体组载体组，定量数据表明干扰载体组中 TTRAP+破骨细胞数目 12.7±2.49、阴性载干扰载体组较空白组、阴性载体组明显异具有统计学意义（P<0.05）。空白组和结果表明，CaMKIIδ基因沉默可显著抑制过 SEM 观察三组骨磨片上骨吸收陷窝形白组吸收陷窝的数目及面积分别为 10±2 为 12±1.23 和 5247±635.24 μm2、 干
【参考文献】：
期刊论文
[1]RANK信号调控破骨细胞分化与成熟的研究进展[J]. 梅良伟,桑文华,陈富春,李晓春,王登峰,吴卓,穆佐洲,邵海龙. 中国骨质疏松杂志. 2018(12)
[2]CaMKⅡδ慢病毒过表达载体构建及其对破骨细胞分化的影响[J]. 张艳波,戚孟春,董伟,张广峰,冯晓洁,温黎明,孙红. 实用医学杂志. 2018(13)
[3]CREB和ERK1/2在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用[J]. 王红美,董伟,戚孟春,冯晓洁,陆大壮,李任,孙红. 解放军医学杂志. 2018(02)
[4]c-fos基因表达在脑缺血中的研究进展[J]. 张婷卓,杜小正,王金海,田亮,袁博,李兴兰. 甘肃中医药大学学报. 2017(05)
[5]AP-1的研究进展[J]. 韩畅畅,万福生. 中国细胞生物学学报. 2017(10)
[6]运动对废用性骨质疏松大鼠破骨细胞分化JNK/AP-1信号通路的影响[J]. 马涛,贾磊,苏红燕. 西安体育学院学报. 2017(05)
[7]OPG/RANK/RANKL信号通路在骨质疏松症中的研究进展和应用[J]. 李子怡,李玉坤. 中华老年骨科与康复电子杂志. 2017(02)
[8]小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养及其在诱导破骨细胞中的应用[J]. 许丹,律颖,朱小语,陈晓文,冯金秋,范爱琴,许雅君. 中国骨质疏松杂志. 2016(10)
[9]CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究[J]. 陆大壮,刘娟娟,戚孟春,温黎明,李任,孙红. 中国病理生理杂志. 2016(10)
[10]CREB与其相关的非编码RNA在肿瘤发生发展中的作用[J]. 孟祥余,庄海慧,王萍. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(08)
博士论文
[1]高糖对RANKL诱导的破骨细胞分化及ATP6vOd2、DC-STAMP表达水平的影响[D]. 许娟.山东大学 2014
[2]基于RANKL/RANK/OPG轴的绝经后骨质疏松症发病机制及健骨颗粒干预研究[D]. 黄云梅.福建中医药大学 2014
硕士论文
[1]CaMKⅡγ信号干扰对破骨细胞分化及相关基因NFATc1、TRAP、c-Src表达的影响[D]. 王会.华北理工大学 2017
[2]CaMKⅡδ基因沉默对MAPKs、CREB信号及破骨细胞分化的影响[D]. 陆大壮.华北理工大学 2017
[3]CaMKⅡδ过表达对破骨细胞分化及下游信号分子CREB、ERK、JNK、p38蛋白活性的影响[D]. 张广峰.华北理工大学 2017
[4]PEMF调控Ca2+/Calcineurin/NFATc1信号通路抑制RANKL诱导的破骨细胞分化[D]. 张杰.南方医科大学 2016
本文编号：3472997
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RAW264.7细胞（倒置相差显微镜，×100）
第 1 章 实验研究mRNA 相对表达水平分别为 1.282±0.234、0.950±0.275、0.377±0.148（（表 3）；空白组与阴性载体组之间无显著性差异（P>0.05），而干扰载白组下降了 70.6%（P<0.01），即 mRNA 干扰效率为 70.6 %（图 2）。表 3 定量分析三组细胞中 CaMKⅡδ mRNA 表达水平 （n=3, x ± s）Table3 Quantitative analysis of CaMKⅡδ mRNA level among the three grouby Real-time PCR（n=3, x ± s）组别 平均相对浓度 F 空白组阴性载体组干扰载体组1.282±0.2340.950±0.2750.377±0.14812.341
图 3 Western-blotting 检测各组细胞 CaMKg.3 Detection of CaMKⅡδ protein in cells amongIIδ基因沉默对破骨细胞生成及吸收功能的胞，观察三组均出现了阳性的多核破骨细较多、体积较大的是空白组和阴性载体组载体组，定量数据表明干扰载体组中 TTRAP+破骨细胞数目 12.7±2.49、阴性载干扰载体组较空白组、阴性载体组明显异具有统计学意义（P<0.05）。空白组和结果表明，CaMKIIδ基因沉默可显著抑制过 SEM 观察三组骨磨片上骨吸收陷窝形白组吸收陷窝的数目及面积分别为 10±2 为 12±1.23 和 5247±635.24 μm2、 干
【参考文献】：
期刊论文
[1]RANK信号调控破骨细胞分化与成熟的研究进展[J]. 梅良伟,桑文华,陈富春,李晓春,王登峰,吴卓,穆佐洲,邵海龙. 中国骨质疏松杂志. 2018(12)
[2]CaMKⅡδ慢病毒过表达载体构建及其对破骨细胞分化的影响[J]. 张艳波,戚孟春,董伟,张广峰,冯晓洁,温黎明,孙红. 实用医学杂志. 2018(13)
[3]CREB和ERK1/2在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用[J]. 王红美,董伟,戚孟春,冯晓洁,陆大壮,李任,孙红. 解放军医学杂志. 2018(02)
[4]c-fos基因表达在脑缺血中的研究进展[J]. 张婷卓,杜小正,王金海,田亮,袁博,李兴兰. 甘肃中医药大学学报. 2017(05)
[5]AP-1的研究进展[J]. 韩畅畅,万福生. 中国细胞生物学学报. 2017(10)
[6]运动对废用性骨质疏松大鼠破骨细胞分化JNK/AP-1信号通路的影响[J]. 马涛,贾磊,苏红燕. 西安体育学院学报. 2017(05)
[7]OPG/RANK/RANKL信号通路在骨质疏松症中的研究进展和应用[J]. 李子怡,李玉坤. 中华老年骨科与康复电子杂志. 2017(02)
[8]小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养及其在诱导破骨细胞中的应用[J]. 许丹,律颖,朱小语,陈晓文,冯金秋,范爱琴,许雅君. 中国骨质疏松杂志. 2016(10)
[9]CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究[J]. 陆大壮,刘娟娟,戚孟春,温黎明,李任,孙红. 中国病理生理杂志. 2016(10)
[10]CREB与其相关的非编码RNA在肿瘤发生发展中的作用[J]. 孟祥余,庄海慧,王萍. 中国生物化学与分子生物学报. 2016(08)
博士论文
[1]高糖对RANKL诱导的破骨细胞分化及ATP6vOd2、DC-STAMP表达水平的影响[D]. 许娟.山东大学 2014
[2]基于RANKL/RANK/OPG轴的绝经后骨质疏松症发病机制及健骨颗粒干预研究[D]. 黄云梅.福建中医药大学 2014
硕士论文
[1]CaMKⅡγ信号干扰对破骨细胞分化及相关基因NFATc1、TRAP、c-Src表达的影响[D]. 王会.华北理工大学 2017
[2]CaMKⅡδ基因沉默对MAPKs、CREB信号及破骨细胞分化的影响[D]. 陆大壮.华北理工大学 2017
[3]CaMKⅡδ过表达对破骨细胞分化及下游信号分子CREB、ERK、JNK、p38蛋白活性的影响[D]. 张广峰.华北理工大学 2017
[4]PEMF调控Ca2+/Calcineurin/NFATc1信号通路抑制RANKL诱导的破骨细胞分化[D]. 张杰.南方医科大学 2016
本文编号：3472997
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