联合应用VEGF及PDGF-BB干预骨髓间充质干细胞的血管化及增殖能力
发布时间：2021-11-13 04:06
目的:探讨体外联合应用VEGF和PDGF-BB两种细胞生长因子对骨髓间充质干细胞增殖及成血管不同阶段相关基因指标mRNA表达量的影响,为优化组织工程干细胞提供理论依据。方法:体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,根据分组:VEGF组、PDGF-BB组、VEGF+PDGF-BB组及对照组,分别用不同浓度VEGF（0、20、40、60、80、100、120 ng/mL）和PDGF-BB（0、20、40、60、80、100、120 ng/mL）单独或联合干预BMSCs,连续7天检测细胞增殖能力,确定最佳促细胞增值浓度。使用最佳促细胞增殖浓度,根据分组干预BMSCs 7天和14天后,提取RNA、逆转录、RT-PCR检测四组细胞Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF成血管基因的表达量。结果:（1）加入生长因子后,细胞增殖能力明显提高,单独作用效果不如联合作用的效果,最佳浓度组组合为:80 ng/mL VEGF+80 ng/mL PDGF-BB。（2）mRNA表达水平,在第7天及第14天这两个检测点,除了对照组,其他三组Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF基因指标的mRNA表达均明显上调,差...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代第3天、原代第7天、第一代、第二代、第三代骨髓间充质干细胞细胞形态图（×5）
加入生长因子干预7天后各组细胞形态图（×5）
新疆医科大学硕士学位论文22样，每管为20μL体系。上普通PCR机，按照产品说明书程序设置，扩增目的基因，大约47min后扩增结束。吸取得到的产物5μL用于后续凝胶电泳实验。（2）凝胶电泳：制胶、电泳方法同前。Rat大鼠Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF基因引物片段大小分别为165bp、146bp、162bp、156bp。因此，我们最终选择Maker600用于凝胶电泳标记引物片段大小，连接好电泳系统后，联通电源，开始电泳，大概15-25min左右，条带即可跑到制胶板的中央。去除胶块，上凝胶成像拍照系统拍照，得到的结果显示用maker标尺，凝胶电泳各基因片段的表达条带与最初引物设计长度完全相符，且条带较亮且均匀。结果见图5。图5引物准确性和特异性的检验Fig.5Testoftheaccuracyandspecificityofprimers4.3实时荧光定量RT-PCR结果分析利用普通PCR仪，通过Touchdown实验方法，确定最佳退火温度及最佳延伸时间，利用最佳条件进行RT-PCR反应。在对荧光定量PCR结果分析时，一般需要看三个地方：基线、CT值和溶解曲线。基线是指在荧光定量PCR反应最初，荧光信号变化不大，几乎接近是一条直线。一般情况下，CT值越小说明起始拷贝数越大。CT值代表了每个PCR反应管到达程序设置的荧光信号值时所需要经历的循环数。而溶解曲线则在一定程度上代表了扩增产物的特异性，若溶解曲线图是单峰，那么引物特异性高。RT-PCR结果见图6-9。
【参考文献】：
期刊论文
[1]非病毒载体介导的基因治疗在骨缺损修复中的研究进展[J]. 任超,周诺. 实用医学杂志. 2019(12)
[2]复合富血小板血浆的自体骨移植联合体外冲击波治疗骨不连[J]. 储伟. 中国骨伤. 2019(05)
[3]脂质体和慢病毒介导P75神经生长因子受体及神经生长因子转染骨髓间充质干细胞的效果比较[J]. 朱伦井,贝朝涌,段江涛,彭称飞,马跃刚,王宁,陈俊毅. 中国组织工程研究. 2019(21)
[4]自体牙骨移植材料在牙槽骨缺损修复中的应用进展[J]. 李冀寅,贺平. 口腔医学研究. 2019(03)
[5]血小板胶-胶原生物活性复合膜修复大鼠牙周骨组织缺损[J]. 张旭凤,符起亚,郑根建,郭玉苏,陈丹宇,符方满,吴慧,王琳. 中国组织工程研究. 2019(14)
[6]Ubiquitin-specific protease 22 enhances intestinal cell proliferation and tissue regeneration after intestinal ischemia reperfusion injury[J]. An-Long Ji,Tong Li,Guo Zu,Dong-Cheng Feng,Yang Li,Guang-Zhi Wang,Ji-Hong Yao,Xiao-Feng Tian. World Journal of Gastroenterology. 2019(07)
[7]VEGF/PELA/bFGF混合微囊促进大鼠BMSCs成血管分化研究[J]. 赵胜利,殷杰,于庆贺,张国炜,闵少雄. 中国修复重建外科杂志. 2019(02)
[8]间充质干细胞相关生长因子在牙槽骨修复的应用进展[J]. 金晓明,陶海彪,江银华. 口腔医学. 2019(01)
[9]超顺磁性壳聚糖明胶微球作为缓释基因载体的磁转染及释放[J]. 岑超德,张永,罗聪,杨晓兰,邬均,吴声忠,刘福尧. 中国组织工程研究. 2019(02)
[10]组织工程骨血管化中种子细胞的研究进展[J]. 赵胜利,史本超,高浚淮,胡攀勇,于庆贺,闵少雄. 医学综述. 2018(20)
本文编号：3492287
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代第3天、原代第7天、第一代、第二代、第三代骨髓间充质干细胞细胞形态图（×5）
加入生长因子干预7天后各组细胞形态图（×5）
新疆医科大学硕士学位论文22样，每管为20μL体系。上普通PCR机，按照产品说明书程序设置，扩增目的基因，大约47min后扩增结束。吸取得到的产物5μL用于后续凝胶电泳实验。（2）凝胶电泳：制胶、电泳方法同前。Rat大鼠Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF基因引物片段大小分别为165bp、146bp、162bp、156bp。因此，我们最终选择Maker600用于凝胶电泳标记引物片段大小，连接好电泳系统后，联通电源，开始电泳，大概15-25min左右，条带即可跑到制胶板的中央。去除胶块，上凝胶成像拍照系统拍照，得到的结果显示用maker标尺，凝胶电泳各基因片段的表达条带与最初引物设计长度完全相符，且条带较亮且均匀。结果见图5。图5引物准确性和特异性的检验Fig.5Testoftheaccuracyandspecificityofprimers4.3实时荧光定量RT-PCR结果分析利用普通PCR仪，通过Touchdown实验方法，确定最佳退火温度及最佳延伸时间，利用最佳条件进行RT-PCR反应。在对荧光定量PCR结果分析时，一般需要看三个地方：基线、CT值和溶解曲线。基线是指在荧光定量PCR反应最初，荧光信号变化不大，几乎接近是一条直线。一般情况下，CT值越小说明起始拷贝数越大。CT值代表了每个PCR反应管到达程序设置的荧光信号值时所需要经历的循环数。而溶解曲线则在一定程度上代表了扩增产物的特异性，若溶解曲线图是单峰，那么引物特异性高。RT-PCR结果见图6-9。
【参考文献】：
期刊论文
[1]非病毒载体介导的基因治疗在骨缺损修复中的研究进展[J]. 任超,周诺. 实用医学杂志. 2019(12)
[2]复合富血小板血浆的自体骨移植联合体外冲击波治疗骨不连[J]. 储伟. 中国骨伤. 2019(05)
[3]脂质体和慢病毒介导P75神经生长因子受体及神经生长因子转染骨髓间充质干细胞的效果比较[J]. 朱伦井,贝朝涌,段江涛,彭称飞,马跃刚,王宁,陈俊毅. 中国组织工程研究. 2019(21)
[4]自体牙骨移植材料在牙槽骨缺损修复中的应用进展[J]. 李冀寅,贺平. 口腔医学研究. 2019(03)
[5]血小板胶-胶原生物活性复合膜修复大鼠牙周骨组织缺损[J]. 张旭凤,符起亚,郑根建,郭玉苏,陈丹宇,符方满,吴慧,王琳. 中国组织工程研究. 2019(14)
[6]Ubiquitin-specific protease 22 enhances intestinal cell proliferation and tissue regeneration after intestinal ischemia reperfusion injury[J]. An-Long Ji,Tong Li,Guo Zu,Dong-Cheng Feng,Yang Li,Guang-Zhi Wang,Ji-Hong Yao,Xiao-Feng Tian. World Journal of Gastroenterology. 2019(07)
[7]VEGF/PELA/bFGF混合微囊促进大鼠BMSCs成血管分化研究[J]. 赵胜利,殷杰,于庆贺,张国炜,闵少雄. 中国修复重建外科杂志. 2019(02)
[8]间充质干细胞相关生长因子在牙槽骨修复的应用进展[J]. 金晓明,陶海彪,江银华. 口腔医学. 2019(01)
[9]超顺磁性壳聚糖明胶微球作为缓释基因载体的磁转染及释放[J]. 岑超德,张永,罗聪,杨晓兰,邬均,吴声忠,刘福尧. 中国组织工程研究. 2019(02)
[10]组织工程骨血管化中种子细胞的研究进展[J]. 赵胜利,史本超,高浚淮,胡攀勇,于庆贺,闵少雄. 医学综述. 2018(20)
本文编号：3492287
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