组蛋白去甲基化酶Jmjd3对不同胚源BMSCs衰老的调控作用

发布时间：2021-12-01 22:27

　　目的:针对不同胚源的大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）表现出的衰老差异,探讨组蛋白去甲基化酶Jmjd3对衰老的调控作用。方法:1.体外提取大鼠下颌骨（mandibular,M）和胫骨（tibia,T）的BMSCs,全骨髓贴壁培养并进行传代。2.将BMSCs消化,离心后按每孔约5×10⁴个细胞,接入细胞培养板。待细胞融合达70%-80%时,进行衰老相关β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色。显微镜下采集图像对衰老细胞计数,检测细胞衰老特征。3.将BMSCs消化,离心后按每孔约2×10⁴个细胞接入12孔细胞培养板中,待细胞融合达60%-70%更换成骨诱导液,每三天换液一次,连续成骨诱导培养14d后,行茜素红染色,通过钙结节形成能力来检测细胞成骨特征。4.通过定量Real-time PCR检测目的基因Jmjd3,p21,p16在两种BMSCs中的表达。5.通过Western Blot检测BMSCs中Jmjd3,p21,p16... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠颌骨缺损手术以及细胞与支架移植过程

南京医科大结 果MSCs 和 M-BMSCs 的体外衰老和成骨特征稳定的第五代的大鼠 M-BMSCs 和 T-BMSCs 进行 SA-β-成蓝色的阳性细胞体积增大，扁平，核大深染，胞质空泡例为（35.33±4.18）%，明显高于 M-BMSCs 组的（21.将第五代 M-BMSCs 和 T-BMSCs 成骨诱导 14 d 后进行示 M-BMSCs 组的钙结节的数量明显多于 T-BMSCs 组，.79±0.22、2.78±0.36，差异具有统计意义（P<0.05）。说与四肢骨来源的 BMSCs 相比，具有更强的抗衰老能力和AM-BMSCs T-BMSCs

A：衰老染色（ 200）；B：Western blot 检测图 4 敲减 Jmjd3 提高 T-BMSCs 的抗衰老能Fig.4 Inhibition of Jmjd3 promotes the ability of anti-senesce4．移植敲减 shJmjd3 的 T-BMSCs 有利于骨修复BMSCs 移植 6 周后，Micro-CT 观察新骨的形成情况，移植区的 BMD 和 BV/TV。结果显示，M-BMSCs 组比 T-多的骨小梁结构；与 GFP-T-BMSCs 组相比，shJmjd3-T-BM量形成（图 5）。Masson 三色染色检测发现，M-BMSCs 组成更多骨胶原纤维；与 GFP-T-BMSCs 组相比，shJmjd3-T原纤维更多（图 6）。定量分析结果显示，M-BMSCs 组 BM成率高于 T-BMSCs 组（P<0.05），shJmjd3-T-BMSCs GFP-T-BMSCs 组（P<0.05）（表 2）。这些结果提示，移植有利于 BMSCs 修复骨缺损。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3527174