miR-376a-3p调控人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质向分化的作用研究

发布时间：2022-01-15 02:42

　　研究背景:牙齿的发育是一个上皮与间充质相互作用的复杂的生物学过程,当牙冠发育即将完成时牙根开始发育。牙根发育到一定程度开始萌出,从牙齿萌出到牙根发育完成,一般需要3-5年。这期间如果发生龋病或外伤,因不能得到及时治疗,常引起牙髓病变甚至根尖周炎,导致牙齿发育停滞,处于该阶段的年轻恒牙髓腔宽大、根管壁薄、根尖敞开使牙齿极易折裂,致使恒牙幼年早失,严重影响咀嚼功能及生活质量。涉及前牙还会影响美观。因此,探索促使牙根继续发育的生物学治疗方法-牙髓牙本质再生,成为牙髓病学领域研究的热点。根尖乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAP）来源于恒牙根尖乳头组织,可分化为成牙本质细胞,形成根部牙髓和牙本质。因SCAP为发育阶段的干细胞,与相同来源的牙髓干细胞相比,具有更强的增殖和分化潜能。在牙髓牙本质的研究中,SCAP作为种子细胞越来越受到重视。然而其增殖分化的机制还不清楚。MicroRNA（miRNA）是一类内源性、非编码小分子单链RNA,与特定mRNA的3’端非编码区（3’UTR）互补结合,抑制靶基因表达发挥转录后调控作用。miRNA在成骨细胞分化和骨组织... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＳＣＡＰ的组织来源及细胞培养??Ａ．包含根尖乳头的第三恒磨牙：Ｂ．原代培养的细胞（４０＞〇?；?Ｃ．传代培养的细胞（４〇ｘ）??

?第一部分人根尖乳头干细胞的分离、培养和鉴定???２?ＳＣＡＰ的增殖??根据ＣＣＫ－８实验所测数据绘制得到ＳＣＡＰ的生长曲线呈Ｓ型（图２），表??现为三个不同的生长期：生长缓慢的潜伏期、斜率较大的指数增长期和平台期。??接种后前２天，细胞生长缓慢，２天后增殖明显加快，３－６天呈快速生长的趋势??进入指数生长期，此后细胞增殖变缓，进入平台期。结晶紫染色显微镜下观察??到细胞呈克隆生长，形态多为长梭形。??Ａ?Ｂ??３１?ＯＤ?Ｖａｌｕｅｓ??ｉ２．?．?－：：??０－１?１?．?．?．?．?．?１??０?１?２?３?４?５?６?７??Ｄａｙｓ??图２?ＳＣＡＰ的生长曲线和克隆形成情况??Ａ．?ＳＣＡＰ的生长曲线呈Ｓ型；Ｂ．细胞呈克隆生长??３?ＳＣＡＰ表面分子表型的表达与特征??通过流式细胞仪检测与分析ＳＣＡＰ表面分子表型，显示间充质干细胞表面??标记物ＳＴＲＯ－１和ＳＣＡＰ特异性表面标记物ＣＤ２４呈阳性表达，阳性率分别为??３６．５％和２２．１％。而造血干细胞表面标记物ＣＤ３４和ＣＤ４５的表达率为０．６％和??０．０４７％，被认为呈阴性表达（图３），表明所培养的ＳＣＡＰ具备间充质干细胞的??特性，且在取材操作过程中没有造血细胞的污染。??１３??

图３流式细胞术检测ＳＣＡＰ的表面分子表型??４?ＳＣＡＰ多向分化能力鉴定??ＳＣＡＰ经过成骨／成牙本质向诱导培养７天后，ＡＬＰ染色显示胞浆呈明显的??蓝紫色，对照组则未表现出特征性颜色变化（图４Ａ，Ｄ）；诱导培养２１天后，??显微镜下见细胞呈复层生长，在密集生长的细胞层内可见矿化结节，茜素红染??色显示大量的红褐色结节或颗粒生成，对照组未见红染的结节或颗粒（图４Ｂ，Ｅ）；??成脂诱导２８天后，油红０染色显示大小不一的红色脂滴形成，而对照组未见脂??滴形成（图４Ｃ，Ｆ）。表明处于不同培养条件或微环境中的ＳＣＡＰ可以分化为不??同的细胞系。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-376b-3p可促进Runx2诱导C2C12细胞进行成骨细胞早期分化[J]. 耿倩倩,余守和,张越,王红梅,孙奋勇.  中国组织工程研究. 2013(28)



本文编号：3589734