脂肪干细胞增殖、成骨分化及其与支架生物相容性研究

发布时间：2023-04-05 08:56

　　目的:①探索简便、高效的方法获得富血小板血浆(platelet-ich plasma,PRP)并观察人脂肪干细胞成骨矿化细胞分化过程中PRP的作用,及其与支架材料纳米羟基磷灰石/胶原生物相容性的实验研究。②观察釉基质蛋白(eamel matrix proteins, EMPs)对Beagle犬脂肪干细胞增殖的影响,探索EMPs促进脂肪干细胞增殖作用的最佳浓度。 方法:①抽取三名健康成人静脉血各40ml,分别用二次离心法和三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析,并进行相关系数分析。酶消化法获得人脂肪干细胞,取生长状态良好的第3代人脂肪干细胞分别培养在含100ml/L FBS的DMEM培养液、成骨细胞诱导液和添加PRP的成骨细胞诱导液中,通过Von Kossa染色观察60ul/mLPRP对人脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响;并将人脂肪干细胞与纳米羟基磷灰石/胶原复合培养7天后,环境扫描电镜观察人脂肪干细胞在支架材料上附着增殖情况。 ②提取猪EMPs并SDS-PAGE结果鉴定,分别用含400 mg/L、200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L EMPs作用于体外培养Beagle犬脂...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
研究一 人脂肪干细胞成骨分化过程中 PRP 的作用及其与纳米羟基磷灰石/胶原生物相容性的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 标本采集
        2.2 主要仪器和设备
        2.3 试剂来源及主要液体配制
            2.3.1 胎牛血清（FBS）
            2.3.2 细胞消化液
            2.3.3 细胞冻存液
            2.3.4 0.01M pH 7.4 磷酸盐(PBS)缓冲液
            2.3.5 DMEM 培养液
            2.3.6 PBS
            2.3.7 青霉素
            2.3.8 链霉素
            2.3.9 红细胞裂解液
            2.3.10 I 型胶原酶
            2.3.11 中性蛋白酶
            2.3.12 牛凝血酶的配制
            2.3.13 4%多聚甲醛
            2.3.14 枸橼酸钠抗凝剂
            2.3.15 瑞氏染液的配制
        2.4 细胞培养
            2.4.1 培养器皿的准备
            2.4.2 细胞复苏
            2.4.3 细胞培养和传代
            2.4.4 细胞冻存
    3 实验方法
        3.1 PRP 的制备及比较
            3.1.1 传统二次离心法制备PRP（Landesber 法）
            3.1.2 改良三次离心法制备PRP
            3.1.3 统计学分析
        3.2 人 ADSCs 分离培养及鉴定
            3.2.1 人ADSCs 分离培养
            3.2.2 人 ADSCs 的鉴定
            3.2.3 人ADSCs 生长曲线测定
        3.3 PRP 对人 ADSCs 成骨矿化的影响
            3.3.1 PRP 对人 ADSCs 成骨矿化的影响
            3.3.2 Von Kossa 钙结节染色
        3.4 人 ADSCs 与纳米羟基磷灰石/胶原共培养
    4 结果
        4.1 全血与传统二次离心法、改良三次离心法制备的PRP 中的血小板数量
        4.2 传统二次离心法、改良三次离心法制备的 PRP 相关系数的比较
        4.3 PRP 的制备及瑞氏染色
        4.4 人脂肪干细胞分离培养
        4.5 人 ADSCs 免疫组化鉴定
        4.6 人 ADSCs 生长曲线测定
        4.7 PRP 对人脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响
        4.8 人脂肪干细胞与纳米羟基磷灰石/胶原共培养
    5 讨论
        5.1 脂肪干细胞作为种子细胞的应用前景
        5.2 PRP 的概念及应用前景
        5.3 PRP 制作方法比较
        5.4 脂肪干细胞成骨分化过程中富血小板血浆（PRP）的作用
        5.5 脂肪干细胞增殖过程中富血小板血浆对其的影响
        5.6 人脂肪干细胞与纳米羟基磷灰石/胶原支架生物相容性
    6 结论与展望
        6.1 结论
        6.2 展望
    参考文献
研究二 釉基质蛋白的提取及对脂肪干细胞增殖的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 标本采集
            2.1.2 主要试剂和仪器同第一部分
    3 实验方法
        3.1 EMPs 的提取
        3.2 蛋白质聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
        3.3 EMPs 对 Beagle 犬 ADSCs 增殖影响的测定
        3.4 统计学分析
    4 结果
        4.1 SDS-PAGE 结果
        4.2 EMPs 对 Beagle 犬 ADSCs 增殖的影响
    5 讨论
        5.1 EMPs
        5.2 EMPs 促进细胞增殖的作用
    6 结论与展望
        6.1 结论
        6.2 展望
    参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3783126