胰岛素对高糖环境下人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的体外研究

发布时间：2017-05-20 01:09

  本文关键词：胰岛素对高糖环境下人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过观察胰岛素(INS)对于高糖条件下人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)细胞增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、骨钙素(OCN)、白介素-6(IL-6)表达水平的影响,了解牙周病在其发生发展过程中与血糖水平的关系,发现细胞增殖和凋亡的有效调控机制,为临床治疗糖尿病伴慢性牙周病提供新临床思路。方法：采用健康人群因正畸拔除的前磨牙体外培养人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs),然后采用5.5、25、45mmol/L高糖环境和胰岛素(INS)终浓度为10-6mol/L不同干预模式,分别作用体外培养人牙周膜成纤维细胞。实验分为5组：A组为正常对照组(5.5 mmol/L). B组为中高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、C组为高糖组(45mmol/L葡萄糖)、B + INS组、C + INS组。分别对人牙周膜成纤维细胞进行刺激和诱导培养,使用流式细胞仪检测人牙周膜成纤维细胞在不同高糖浓度刺激下细胞增殖及凋亡的情况；使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同高糖浓度刺激下人牙周膜成纤维细肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素1β(IL-1β)、骨钙素(OCN)、白介素-6(IL-6)的表达水平,使用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学方差分析检验,实验结果以X±S表示,p0.05为有统计学意义。结果：1.不同糖浓度对人牙周膜细胞增殖活性的影响A组正常对照组(5.5 mmol/L Glu)的结果表达显示对人牙周膜成纤维细胞的增殖无显著影响B组中高糖组(25 mmol/L Glu) Glu的结果表达显示开始出现浓度依赖性抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖,细胞生长速度比正常组减慢,细胞凋亡比例增加。C组为高糖组(45mmol/L Glu)的结果表达显示对抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖最为显著,细胞生长速度减慢、细胞凋亡比例显著增加。B + INS组,中高糖组(25 mmol/L Glu)中加入胰岛素后对人牙周膜成纤维细胞细胞生长速度恢复、细胞凋亡比例显著减少。但仍低于于正常糖浓度组。C+INS组,加入胰岛素后对人牙周膜成纤维细胞生长速度及凋亡比例有所下降,但仍显著低于于正常糖浓度组和中糖浓度组。五组细胞对抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖,细胞生长速度、细胞凋亡比例相互比较均有统计学意义(p0.05)2.不同糖浓度对人牙周膜细胞肿瘤坏死因子-a (TNF-a)、白介素1β (IL-1β)、骨钙素(OCN),白介素-6(IL-6)的表达A组正常对照组(5.5 mmol/L Glu)对TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN的表达低于中糖浓度组及高糖浓度组；对OCN的表达高于中糖浓度组及高糖浓度组。B组中高糖组(25 mmol/L Glu);对OCN的表达低于正常浓度组。C组为高糖组(45mmol/L Glu)对TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN的表达显著高于正常浓度组和中糖浓度组；对OCN的表达显著低于正常浓度组和中糖浓度组。B + INS组,中高糖组(25 mmol/L Glu)加入胰岛素后对‘TNF-α、IL-1β、IL-6、 OCN的表达仍高于正常浓度组；对OCN的表达升高。C + INS组,加入胰岛素后对TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN的表达显著高于正常浓度组和中糖浓度组；对OCN的表达升高。五组细胞对TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN的表达相互比较均有统计学意义(p0.05)结论：高糖环境可显著抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖、诱导HPDLFs凋亡,上调TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN表达。胰岛素可显著调节糖环境诱导下的抑制的人牙周膜成纤维细胞增殖、细胞凋亡和TNF-α、IL-1β、IL-6、OCN表达。
【关键词】：人牙周膜成纤维细胞 胰岛素 肿瘤坏死因子-α 白介素-6 骨钙素 白介素-1β 细胞增殖
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.4;R587.1
【目录】：

• 英文缩略词表7-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-17
• 实验一 胰岛素对高糖环境下人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖活性的影响17-31
• 1. 实验对象17
• 2. 实验材料、仪器17-19
• 2.1 实验试剂17-18
• 2.2 实验仪器与设备18-19
• 2.3 实验试剂的配制19
• 3. 实验方法19-23
• 3.1 实验分组19-20
• 3.2 酶消化结合组织块法hPDLCs原代培养20
• 3.3 人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)的传代培养接种20-21
• 3.4 细胞形态学观察21
• 3.5 免疫荧光染色鉴定21
• 3.6 检测细胞生长曲线21-22
• 3.7 噻唑蓝(MTT)法检测22
• 3.8 流式细胞仪检测细胞凋亡22-23
• 3.9 统计学分析23
• 4. 实验结果23-28
• 4.1 人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)形态学观察23
• 4.2 免疫组化23-24
• 4.3 MTT法检测人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)生长曲线24-25
• 4.4 流式细胞仪检测人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖活性25-27
• 4.5 流式细胞检测人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)凋亡27-28
• 5. 讨论28-31
• 实验二 胰岛素对高糖环境下人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子的表达影响31-47
• 1. 实验材料、仪器31-32
• 1.1 实验试剂31-32
• 1.2 实验仪器与设备32
• 2. 实验方法32-34
• 2.1 人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)炎症因子的表达33
• 2.2 酶联免疫吸附法(ELISA)检测33-34
• 2.3 实验数据统计学处理34
• 3 实验结果34-42
• 3.1 24h、48h、72h五组培养基对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)TNF-α的表达34-36
• 3.2 24h、48h、72h,五组培养基对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)IL-1β的表达36-38
• 3.3 24h、48h、72h,五组培养基对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)IL-6的表达38-40
• 3.4 24h、48h、72h,五组培养基对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)人骨钙素的表达40-42
• 4 讨论42-47
• 参考文献47-53
• 文献综述53-61
• 参考文献56-61
• 在读期间发表文章61-62
• 致谢62-63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘加强;刘洪臣;冯元;孙斌;;胰岛素在高糖环境诱发牙周膜细胞凋亡过程中的调节作用[J];口腔颌面修复学杂志;2011年01期

  本文关键词：胰岛素对高糖环境下人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：380349