p53通过调控长链非编码RNA lncRNAp53urlnc对舌鳞癌细胞影响

发布时间：2023-11-11 09:04

　　目的通过重组质粒载体,慢病毒包装转染技术,体外研究长链非编码RNA(lncRNA)与p53的表达之间关系,同时研究敲低lncRNAp53urlnc对舌鳞癌细胞(SCC-3)的影响,为将来舌鳞癌的治疗提供新的思路。方法使用高通量测序技术,对p53诱导上调系统的H1299细胞进行高通量测序技术分析,选取一条受p53诱导上调倍数明显的lncRNA,即lncRNAp53urlnc为研究对象,构建相应重组质粒载体。培养SCC-3细胞,在SCC-3细胞中分别敲低和过表达p53后,提取各组RNA和蛋白,通过Western blot技术检测p53蛋白的表达,通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测lncRNAp53urlnc的表达。构建shlncRNAp53urlnc载体,包装病毒,并转染入SCC-3细胞,qRT-PCR检测转染效率,采用MTT法、集落形成试验来检测转染shlncRNAp53urlnc后SCC-3细胞生长增殖情况。结果 Doxycycline 处理 H1299p53teton 细胞后,p53 和 lncRNAp53urlnc 的表达均随时间而增大;敲低SCC-3细胞中p53的表达,...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株与细菌
        2.1.2 实验主要试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验所用主要试剂的配制和储存方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
            2.2.1.1 细胞传代技术
            2.2.1.2 细胞冻存技术
            2.2.1.3 细胞复苏技术
        2.2.2 药物处理
        2.2.3 重组质粒载体的构建
        2.2.4 慢病毒包装和转染
            2.2.4.1 慢病毒包装
            2.2.4.2 慢病毒转染
        2.2.5 qRT PCR检测
            2.2.5.1 细胞总RNA的抽提
            2.2.5.2 逆转录获得cDNA
            2.2.5.3 PCR反应
        2.2.6 Western blot检测
        2.2.7 MTT法检测
        2.2.8 集落形成实验检测
    2.3 统计分析
3 结果
    3.1 SCC-3细胞的形态学观察
    3.2 p53上调lncRNAp53urlnc表达
    3.3 敲低p53对SCC-3细胞中lncRNAp53urlnc表达的影响
    3.4 过表达p53对SCC-3细胞中lncRNAp53urlnc表达的影响
    3.5 shlncRNAp53urlnc干扰lncRNAp53urlnc的表达
    3.6 shlncRNAp53urlnc对SCC-3细胞生长的影响
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3862335