ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌重组菌毛对血管内皮细胞功能的影响

发布时间：2024-03-13 18:19

　　目的：观察ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis)重组菌毛蛋白rFimA对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)表达和分泌致炎细胞因子、粘附分子和趋化因子的影响,探讨P. gingivalis及其菌毛蛋白FimA在动脉粥样硬化(atherosclerosis, As)发生发展中的可能作用以及作为牙周炎与As相关的物质基础的可能。方法：标准条件下厌氧培养ⅣfimA型P.gingivalis(W83),收集菌液提取细菌DNA,克隆ⅣfimA型Pgingivalis(W83)的fimA序列,构建fimA的原核表达系统pET-30a-FimA BL21DE3, IPTG诱导表达重组菌毛蛋白rFimA;体外培养HUVEC,待HUVEC单层融合后,分别加入纯化后不同浓度的Ⅳ型rFimA,共同培养2h、6h、24h,采用ELISA法测定培养上清液中致炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和趋化因子IL-8、MCP-1的分泌量；RT-PCR检测HUVEC...

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【部分图文】：

图1重组融合蛋白构建示意图

达质粒命名pET-FimA。Ne()IEcoRI正功i《Iln图1Fig.l肠激酶作用位点日F皿重组融合蛋白构建示意图ConstrUetiondiagr出旧ofreeombinantfusionProteinXhO甸准绷】既惚H雇耐劫l弓，73)p〔了蔽至引心如功洲__卜，....

图3重组表达质粒载体pET-FimA构建流程图

3.1.3原核表达载体pE卜30a一ilnA构建利用基因工程技术按照图1至图3示意构建原核表达载体。将PCR产物与pMD18一T载体连接，将10林L连接产物一与200卜tLDHS。感受态细胞充分混合，置冰上30min，转入42oC金属浴热冲击905，加入室温的SOC培养基80....

图8人脐静脉内皮细胞呈现典型铺路石状镶嵌排列Fig.8HUVECshowedt卯ieallyeobblestonemosaiearrangement

倒置显微镜下观察可见，人脐静脉内皮细胞贴壁生长，呈菱形或多角形，边界清楚，胞浆丰富。胞核为圆形或椭圆形，可见一两个核仁。细胞生长迅速，2~5天融合成片，单层生长，互不重叠，呈现典型铺路石状镶嵌排列(见图8)。图8人脐静脉内皮细胞呈现典型铺路石状镶嵌排列Fig.8HUVECsh....

图6融合蛋白rFimA与Histag

本文编号：3927383