P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用

发布时间：2024-05-24 18:59

　　目的：翼外肌在错(?)畸形的发展及诊疗的各个阶段中起着重要作用,可以受到外环境改变的刺激而发生适应性改建。本研究在成功构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型的基础上研究P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。 方法：本实验将实验细胞分为对照组和抑制剂组。对每组细胞分别施加0小时,6小时,12小时和24小时的周期性张应力。加力设备采用多通道细胞牵张应力加载系统,加力的力值设定为15%,每分钟10循环,每循环包括3s牵张,3s松弛。应用Hoechst33258和光学显微镜检测细胞凋亡的形态学变化；RT-PCR和流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western Blot检测信号通路中P38MAPK蛋白P-P38MAPK蛋白的表达变化情况。实验结果应用SPSS17.0软件分析处理。 结果：光学显微镜可见持续张应力的作用下,骨骼肌成肌细胞发生不同程度的凋亡。Hoechst 33258检测观察到细胞受力后细胞核固缩并出现凋亡小体。RT-PCR和流式细胞术结果显示随加力时间的延长细胞凋亡率增加(P<0.05),抑制剂SB203580组的凋亡率明显小于对照组,且P38MAPK蛋白和P-P3...

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第1章 成肌细胞的体外培养及力学刺激模型的构建
    1.1 主要材料与试剂
    1.2 成肌细胞的体外复苏、培养、传代和冻存
    1.3 成肌细胞力学刺激模型的构建
第2章 P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用
    2.1 主要材料与试剂
    2.2 成肌细胞力学刺激模型的建立
    2.3 光学显微镜观察
    2.4 Hoechst 33258染色
    2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
    2.6 RT-PCR检测细胞凋亡
    2.7 Western Blot检测蛋白表达情况
    2.8 抑制剂SB203580的应用
    2.9 加入抑制剂后成肌细胞细胞凋亡和P38MAPK的检测
第3章 实验结果
    3.1 细胞种板及力学刺激模型构建
    3.2 细胞加力后形态学改变
    3.3 Hoechst 33258染色结果
    3.4 流式细胞术检测细胞凋亡
    3.5 RT-PCR检测细胞凋亡
    3.6 Western Blot检测蛋白表达情况
第4章 讨论
    4.1 成肌细胞的体外培养
    4.2 细胞力学
    4.3 周期性张应力对翼外肌影响的研究进展
    4.4 P38MAPK信号通路
    4.5 P38MAPK信号通路与细胞凋亡的关系
    4.6 关于本实验
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3981120