维生素C诱导人脱落乳牙牙髓干细胞膜片形成及体外成骨实验初步研究

发布时间：2024-09-17 12:34

　　目的： 应用酶消化法培养获得人脱落乳牙牙髓干细胞,并进行分离、纯化和鉴定,采用维生素C诱导法形成人脱落乳牙牙髓干细胞膜片,探讨其体外骨向分化能力,为人脱落乳牙牙髓干细胞膜片临床应用打下临床前期实验基础。 方法： 1.人脱落乳牙牙髓干细胞的原代培养、分离纯化、鉴定。 选取6-10岁健康儿童因滞留而拔除的乳牙,采用酶消化法获得单细胞悬液,有限稀释法进行分离、纯化,获得人脱落乳牙牙髓干细胞。测定细胞克隆形成率,倒置显微镜下逐日观察细胞的生长状态及细胞倍增能力。流式细胞仪检测分析其表面抗原CD146、CD90、SSEA-4、OCT-4等的表达情况。取生长状况良好的第三代人脱落乳牙牙髓干细胞,进行成骨和成脂诱导,观察细胞形态变化,分别行碱性磷酸酶染色、茜素红染色和油红O染色,检测成骨分化和成脂分化情况,鉴定其多向分化能力。 2.维生素C诱导人脱落乳牙牙髓干细胞膜片的形成及成骨分化能力检测 将第3代人脱落乳牙牙髓干细胞,在含20、50、80、100μg/ml维生素C α-MEM培养液下诱导培养10-14天,以获得能诱导形成完整的、连续的人脱落乳牙牙髓干细胞膜片的合适的维生素C...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、人脱落乳牙牙髓干细胞原代培养、分离纯化、鉴定
    1.1 对象和方法
        1.1.1 组织的获得
        1.1.2 实验试剂及设备
        1.1.3 人脱落乳牙牙髓干细胞原代培养收集
        1.1.4 有限稀释法分离纯化人脱落乳牙牙髓干细胞
        1.1.5 细胞形态学观察
        1.1.6 细胞克隆形成率(colony forming units,CFU)的测定
        1.1.7 流式细胞仪表面抗原检测
        1.1.8 体外成骨分化诱导实验
        1.1.9 体外成脂诱导实验
    1.2 结果
        1.2.1 细胞形态倒置显微镜观察
        1.2.2 细胞形态HE染色观察
        1.2.3 人脱落乳牙牙髓干细胞克隆形成率(colony forming units,CFU)
        1.2.4 流式细胞仪表面抗原检测
        1.2.5 体外成骨分化诱导矿化结节形成茜素红染色情况
        1.2.6 体外成骨分化诱导碱性磷酸酶染色结果
        1.2.7 体外成脂诱导油红-0染色及阳性细胞率
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、维生素C诱导的人脱落乳牙牙髓干细胞细胞膜片的形成及成骨分化能力检测
    2.1 对象和方法
        2.1.1 主要的实验试剂及设备
        2.1.2 维生素C诱导的人脱落乳牙牙髓干细胞细胞膜片的形成
        2. 1.3细胞膜片HE染色观察
        2.1.4 茜素红染色
        2.1.5 碱性磷酸酶染色
        2.1.6 半定量RT-PCR检测Runx2、OCN的表达
    2.2 结果
        2.2.1 细胞膜片培养倒置显微镜下观察
        2.2.2 细胞膜片的获得
        2.2.3 细胞膜片HE染色观察
        2.2.4 茜素红染色
        2.2.5 碱性磷酸酶染色
        2.2.6 半定量RT-PCR检测Runx-2、OCN的表达
    2.3 讨论
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    综述参考文献
致谢



本文编号：4005461