非综合征性唇腭裂患者血浆外泌体miRNA的表达分析

发布时间：2024-09-17 16:16

　　目的:本研究通过提取非综合征性唇腭裂患者及正常人的血浆外泌体,并对外泌体的浓度进行测量分析,探讨血浆中外泌体浓度与唇腭裂发生之间的关系。进一步抽提外泌体中miRNA,运用miRNA测序筛选出非综合征性唇腭裂患儿血浆外泌体中异常表达的miRNA,并进行生物信息学分析,预测其参与的生物学过程及信号通路。方法:收集8例非综合征性唇腭裂患儿以及性别年龄与之相匹配的8名健康儿童的外周血10ml,通过离心分离血浆,利用QIAGEN exoEasy Maxi Kit试剂盒,使用超滤法提取血浆中的外泌体;在透射电镜下观察外泌体的形态、测量其大小,并计数,BCA法测定外泌体蛋白浓度,并进行统计学分析。另采用Trizol法提取外泌体中的miRNA,构建miRNA文库,用Agilent2100 miRNA微阵列芯片分析,筛选显著差异表达的miRNA,预测其相应的靶基因,并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果:第一部分:本研究成功从16例血浆样本中分离外泌体,透射电镜下观察到30-100nm大小不一的囊泡状结构,符合外泌体的电镜表现,在透射电镜相邻的四个视野下,测得外泌体总数量47,最小直径为40nm,...

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.外泌体分离流程

图1.外泌体分离流程定——电镜观察样品10μl加于200目铜网上沉淀10分钟，滤纸吸去浮铀10μl滴加于铜网上沉淀1分钟，滤纸吸去浮液；分钟；成像。度测定方法和工作液的制备制备要求制作一组蛋白质标准品表1.系列稀释牛血清白蛋白（BSA）标准品稀释液体积....

图2.标准曲线

所有EP管冷却至室温。.4蛋白浓度测定。利用BCA蛋白定量法对外泌体的浓度进行测定[16]。在Nanodrop2100BCA测定，参照标准曲线（图2），读取各样品的蛋白浓度。

图3.1透射电镜下外泌体形态观察

符合外泌体的电镜表现，且可观察到其典型的茶托状形态（图3.1）。图3.1透射电镜下外泌体形态观察2.2AutomatedCapillaryWesternBlot结果检测外泌体标记蛋白TGS101、CD81的表达情况，见图3.2，非综合征性唇腭裂患者和正常对照者的....

图3.2外泌体WES胶图A：正常对照者B：NSCL/P患者

WesternBlot结果白TGS101、CD81的表达情况，见图3外泌体中均表达TSG101和CD81。

本文编号：4005712