模拟微重力对变异链球菌生长、产酸及合成胞外多糖影响的研究

发布时间：2017-06-03 08:19

  本文关键词：模拟微重力对变异链球菌生长、产酸及合成胞外多糖影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究发现,微重力环境下一些条件致病菌的毒力和致病性增加或减弱。龋病是在以细菌为主的多种因素作用下发生的口腔常见疾病,其中变异链球菌是目前公认的主要致龋菌之一。本研究旨在观察模拟微重力环境对变异链球菌的生长、形态学、产酸能力、合成胞外多糖能力及gtfs mRNA表达的影响,探讨模拟微重力环境下变异链球菌致龋能力的变化,为维护航天员的口腔健康提供实验依据。采用高截面纵横比容器(high aspect ratio vessel,HARV)建立模拟微重力细菌培养模型。模拟微重力组及对照组分别在培养2h、4h、6h、8h、10h、12h、16h、20h和24 h时取菌悬液,用分光光度计测定菌液的OD600nm吸光度值。每组设3个样本,实验重复3次,取平均值,绘制生长曲线,观察模拟微重力环境对变异链球菌生长的影响。模拟微重力组及对照组分别在培养24 h时取菌悬液,收集菌体,固定后采用扫描电镜和透射电镜观察模拟微重力环境下变异链球菌形态学的变化。模拟微重力组及对照组培养24h时,用精密pH计测定菌液的pH值,并计算pH的变化值ΔpH(即初始pH值减去培养24h时菌液pH值)。每组设3个样本,实验重复3次,取平均值。通过ΔpH间接反映模拟微重力环境对变异链球菌产酸能力的影响。模拟微重力组及对照组培养24h时,利用稀释涂布平板法测定两组样本中的细菌量,采用蒽酮法测定两组样本中水溶性多糖(water soluble glucan,WSG)和水不溶性多糖(water insoluble glucan,WIG)的含量,计算细菌合成胞外多糖的能力:细菌合成胞外多糖的能力=合成胞外多糖的量/细菌的量,观察模拟微重力对变异链球菌合成水不溶性及水溶性胞外多糖能力的影响。模拟微重力组及对照组培养24h时,分别收集模拟微重力及对照组菌液,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,Q-PCR)方法检测模拟微重力对变异链球菌的gtfsmrna表达的影响。本文获得主要结果如下:1.模拟微重力组及对照组均生长良好,具有静止期、对数生长期和平台期,生长曲线呈类似“s”形。模拟微重力条件下变异链球菌培养2h~4h后进入对数生长期,约12h进入平台期;对照组在4h后才进入对数生长期,16h进入平台期。经统计学分析,模拟微重力组与对照组相比,2h、4h、6h、8h、10h和12h的od600nm值升高,其差异有统计学意义(p0.05);16h、20h和24h的od600nm值无明显变化,其差异无统计学意义(p0.05)。扫描电镜图片显示,与对照组相比,模拟微重力组变异链球菌有较明显的形态学改变。对照组细菌形态规则,结构完整,呈球杆状,表面不光滑,菌体之间存在较多的不定形胶冻样物质,模拟微重力组菌体表面较光滑,细菌间的不定形物质明显少于对照组。透射电镜观察可见微重力环境下变异链球菌的超微结构有显著改变。对照组可见细菌荚膜、细胞壁、细胞膜结构清晰完整,形态正常,分裂后的细菌形态对称;模拟微重力组细菌的荚膜部分减少,分裂状态下的细菌两极不对称。2.培养24h时,模拟微重力组及正常对照组的Δph的差异无统计学意义(p0.05)。模拟微重力条件下变异链球菌合成水溶性和水不溶性胞外多糖的量均少于对照组细菌的产糖量,具有统计学意义(p0.05),合成水溶性和水不溶性胞外多糖的能力较对照组相比均有明显抑制,具有统计学意义(p0.05)。3.模拟微重力环境下培养24h时,变异链球菌gtfb,gtfc,gtfdmrna表达均明显降低,与对照组之间均有显著差异(p0.05)。基于以上结果,本文得出如下结论:1.模拟微重力环境下变异链球菌生长的静止期缩短,对数期提前,模拟微重力环境培养2h~12h时变异链球菌具有生长加快的趋势。模拟微重力环境下变异链球菌有较明显的形态学改变。2.模拟微重力环境下培养24h时,变异链球菌菌液的ph值无明显变化,变异链球菌合成水溶性和水不溶性胞外多糖的能力受到明显抑制。3.模拟微重力环境下培养24h时,变异链球菌gtfB,gtfC,gtf D mRNA表达受到明显的抑制作用。
【关键词】：模拟微重力 变异链球菌 生长 胞外多糖
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.1
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 实验一 模拟微重力对变异链球菌生长及形态学的影响16-24
• 1 引言16
• 2 材料与方法16-19
• 3 结果19-21
• 4 讨论21-23
• 5 结论23-24
• 实验二 模拟微重力对变异链球菌产酸及合成胞外多糖能力的影响24-32
• 1 引言24
• 2 材料与方法24-27
• 3 结果27-29
• 4 讨论29-31
• 5 结论31-32
• 实验三 模拟微重力对变异链球菌gtfs mRNA表达的影响32-41
• 1 引言32
• 2 材料与方法32-36
• 3 结果36-38
• 4 讨论38-40
• 5 结论40-41
• 全文总结41-43
• 参考文献43-47
• 附录47-49
• 致谢49-50
• 综述50-57
• 参考文献55-57

【参考文献】

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1 周学东,黄正蔚,李继遥,肖悦,刘天佳;黄芩对三种主要致龋菌生长、产酸及产胞外多糖的影响[J];华西医科大学学报;2002年03期

2 尹焕才;薛小平;杨慧;谢玉为;唐蕊华;苏婧;宋凯;呼延霆;汪桦;;模拟微重力环境下细菌生物学效应的初步研究[J];航天医学与医学工程;2009年05期

3 周智;陈惠珍;胡德渝;;壳寡聚糖对变形链球菌影响的电镜观察[J];现代预防医学;2007年10期

4 刘海英;王华华;崔长海;王曼;郭净净;文昭普;李安琪;;可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进[J];实验室科学;2013年02期

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本文编号：417643