成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达质粒的构建及鉴定

发布时间：2017-07-08 07:17

  本文关键词：成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达质粒的构建及鉴定

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【摘要】：目的构建并鉴定人成纤维细胞激活蛋白(FAPα)真核表达质粒pc DNA-w FAPα(野生型FAPα)、pc DNA-t FAPα(胞外段FAPα)和pc DNA-m FAPα(缺失624~704位氨基酸的突变型FAPα)。方法以口腔癌组织总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增w FAPαc DNA基因片段,连接至真核表达质粒pc DNA3.1(+)获得重组pc DNA-w FAPα质粒。以重组pc DNA-w FAPα为模板,扩增t FAPα基因片段;用overlap PCR技术,获得m FAPα基因;分别连接至pc DNA3.1(+)获得重组pc DNA-t FAPα和pc DNA-m FAPα质粒。结果酶切鉴定和测序验证皆显示pc DNA-w FAPα、pc DNA-t FAPα和pc DNA-m FAPα为正确重组质粒。结论成功构建人野生型FAPα(w FAPα)、胞外段FAPα(t FAPα)和突变型FAPα(m FAPα)真核表达质粒,为进一步研究FAPα在口腔鳞癌发病过程中的分子机制奠定基础。
【作者单位】： 南方医科大学南方医院口腔科南方医科大学口腔医学院;
【关键词】： 成纤维细胞激活蛋白 真核表达载体 pc DNA.(+)
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81472536) 广东省科技计划项目(编号:2012B031800139,2014A020212440)
【分类号】：R739.85
【正文快照】：

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本文编号：533523