PRDX3真核表达载体构建及亚细胞定位

发布时间：2017-07-26 11:17

  本文关键词：PRDX3真核表达载体构建及亚细胞定位

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【摘要】：目的构建带FLAG标签的过氧化物还原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)的真核表达载体,并对其在人舌癌SCC15细胞中的定位进行检测。方法以乳腺文库为模板,PCR扩增带有FLAG标签的PRDX3基因片段,并将扩增产物插入到PCDH空载体中,构建成PCDH-FLAG-PRDX3,质粒测序正确后瞬时转染入人胚肾293T细胞,Western免疫印迹检测克隆载体的表达情况,细胞免疫荧光实验检测PRDX3的亚细胞定位。结果双酶切和测序结果表明,PCDH-FLAG-PRDX3真核表达载体构建成功,转染293T细胞后成功表达了FLAG-PRDX3融合蛋白;细胞免疫荧光显示FLAG-PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15细胞的细胞质中,不存在于细胞核内。结论成功构建了带FLAG标签的PRDX3真核表达载体,并检测其定位于舌癌SCC15细胞质中,为进一步明确PRDX3在舌癌发生发展中的功能及分子机制奠定基础。
【作者单位】： 安徽医科大学附属安庆市立医院口腔科;军事医学科学院生物工程研究所;大连医科大学肿瘤干细胞研究院;解放军316医院内分泌科;
【关键词】： 过氧化物还原酶 克隆 真核表达 亚细胞定位
【基金】：国家自然科学基金面上资助项目(81572382)
【分类号】：R739.8
【正文快照】： 过氧化物还原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3,PRX3)是抗氧化物酶的一种,属于过氧化物还原酶家族成员之一。该家族广泛存在于原核生物和真核生物中,是具有过氧化氢酶活性的抗氧化蛋白[1~5]。这一家族主要通过降低活性氧化物(ROS)水平从而在肿瘤发生发展中发挥作用。ROS是一类含氧自

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本文编号：576117