牙胚细胞与BMP4转染的BMSCs相互诱导的体外实验研究

发布时间：2017-08-08 03:02

  本文关键词：牙胚细胞与BMP4转染的BMSCs相互诱导的体外实验研究

  更多相关文章： 骨形态发生蛋4 骨髓间充质干细胞 牙胚细胞 实时荧光定量PCR Western-blotting

【摘要】：目的：构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活性和成牙潜能的影响,探讨牙胚细胞及骨形态发生蛋白4转染的骨髓间充质干细胞的相互间的成牙诱导作用,以期为组织工程牙筛选种子细胞。方法：从成熟人胎盘组织提取RNA后,RT-PCR扩增BMP4基因,连接至plenti6/v5-D-TOPO表达载体,构建出BMP4-plenti6/v5-D-TOPO重组慢病毒表达载体；转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,用MTT法检测转染前后细胞的增殖活性,并将骨髓间充质干细胞和BMP4转染的骨髓间充质干细胞分别与SD大鼠牙胚细胞按1：1比例混合培养,同时将细胞分为五组,BMSCs组、BMP4/BMSCs组、牙胚细胞组、BMSCs/牙胚细胞组(混合组1)、BMP4/BMSCs/牙胚细胞组(混合组2),分别采用实时荧光定量PCR和Western-blotting检测五组细胞Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1成牙相关基因mRNA水平和蛋白水平相对表达量的变化。结果：(1)BMP4基因转染骨髓间充质干细胞后,细胞体外增殖活性增强,(2) BMSCs组和BMP4/BMSCs组相比,BMP4/BMSCs组成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1mRNA水平和蛋白水平表达量增多,差异有统计学意义(P0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平差异无显著性意义(P0.05)。(3)混合组1和混合组2相比,混合组2Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白(AMBN)、牙本质基质蛋白1(DMP1)、同源异型盒基因1 (Dlxl)mRNA水平和蛋白水平表达量增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论：BMP4可提高骨髓间充质干细胞体外增殖活性和牙向分化能力,牙胚细胞与BMP4转染的骨髓间充质干细胞共培养,促进了成牙相关基因的表达,可作为组织工程牙的备选种子细胞。
【关键词】：骨形态发生蛋4 骨髓间充质干细胞 牙胚细胞 实时荧光定量PCR Western-blotting
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-21
• 1 实验材料12-13
• 2 实验方13-19
• 2.1 构建BMP4-pMD 19-T-Vector转移载体13-16
• 2.2 构建BMP4-plenti6/v5-D-TOPO慢病毒表达载体16-17
• 2.3 构建RFP-plenti6/v5-D-TOPO慢病毒表达载体17
• 2.4 BMP4慢病奉载体转染SD大鼠骨间充质干细胞17
• 2.5 MTT细胞增殖活性检测17-18
• 2.6 细胞分组培养观察18
• 2.7 实时荧光定量PCR18-19
• 2.8 Western-blotting19
• 3 统计方法19-20
• 4 技术路线20-21
• 结果21-26
• 讨论26-29
• 小结29-30
• 致谢30-31
• 参考文献31-34
• 综述34-41
• 参考文献38-41
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文41-42
• 导师评阅表42

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本文编号：637889