Er:YAG激光对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

发布时间：2017-09-04 10:41

  本文关键词：Er:YAG激光对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

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【摘要】：背景人牙周膜中含有一群异质性较强的复杂的牙周膜细胞群,主要包括成纤维细胞、成骨细胞、破骨细胞以及未分化的间充质细胞。hPDLCs为该细胞群中最常见的细胞类型,牙周膜细胞具有较强的自我更新及增殖能力,并有较强的分化能力,能不断形成新的纤维及牙骨质,在牙槽骨改建与牙周再生中起重要作用。铒激光(erbium-doped:yttrium-aluminium-garnet, Er:YAG laser)是波长为2940 nm的近红外激光,极易被水吸收,故产热少,对组织损伤小,同时由于其具有良好的切割软硬组织的功效,近年来逐渐被认为是牙周治疗时最具应用前景的激光之一。尽管目前对Er:YAG激光的研究报道较多,然而,关于Er:YAG激光对hPDLCs影响的研究报道尚不多见。鉴于牙周膜细胞在牙周组织修复中的重要作用,本实验拟通过噻唑蓝(methyl-thiazolyl-tetrazolium, MTT)法、克隆形成实验、划痕实验、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)等不同实验方法,观察不同输出功率、相同照射时间和不同照射时间、相同照射功率的Er:YAG激光照射对hPDLCs增殖和分化的影响,为Er:YAG激光在牙周病治疗中的应用提供理论基础。目的1.比较不同输出功率和照射时间Er:YAG激光照射对体外培养的hPDLCs增殖和迁移的影响2.比较不同输出功率和照射时间Er:YAG激光照射对体外培养的hPDLCs成骨向分化的影响。方法 首先收集就诊于南京医科大学附属口腔医院颌面外科因阻生需要拔除的健康第三磨牙(所选牙齿均无龋坏、根尖周炎及牙周炎),采用胰酶加胶原酶消化法分离培养hPDLCs,传至第3代细胞行角蛋白、波形丝蛋白染色,鉴定hPDLCs来源,第3-6代用于后续实验。然后按不同的输出功率、相同照射时间(0 W、0.45 W、0.6 W、0.75 W,10 s)及不同照射时间、相同输出功率(0s、10s、30s、60s,0.6W)对接种细胞行Er:YAG激光照射,通过MTT法、克隆形成实验、划痕实验、Elisa实验、Western blot观察Er:YAG激光照射对hPDLCs增殖、克隆形成能力、细胞迁移、转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)分泌及成骨相关蛋白碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)、核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2, Runx2)表达的影响。结果 1.光学显微镜下观察,用胰酶加胶原酶消化法能成功分离得到长梭形、胞体丰满、胞浆均匀的细胞。免疫细胞化学染色波形丝蛋白呈阳性,角蛋白呈阴性,证明细胞来源于中胚层。2.输出功率为0.45 W、0.6 W,照射时间10s时,可促进细胞的增殖及克隆形成(P0.05),迁移速度较对未照射组快,TGF-β1分泌也较未接受激光照射组多(P0.05)。但此两组间差异无显著性。不同的照射时间进行比较,照射时间10 s时细胞增殖及克隆形成率明显高于未接受激光照射组(P0.05),迁移速度较未照射组加快,TGF-β1分泌较对照组多(P0.05)。60s反之(P0.05)。3.输出功率为0.45W、0.6 W,照射时间10s时,在第3、5、7 d成骨相关蛋白ALP、Runx2表达高于未接受激光照射组(P0.05),在第5d达最大值。OCN的表达在第3、5、7d高于未接受激光照射组(P0.05),第7d表达最高。但此两组间差异无显著性。不同的照射时间进行比较,ALP、Runx2表达在第3、5、7d高于对照组,第5d表达量最高。OCN的表达在第3、5、7d高于对照组(P0.05),第7d表达量最高。60s反之。结论 1.可以通过胰酶加胶原酶消化法分离hPDLCs,结合取样部位、细胞镜下形态及免疫细胞化学染色结果,可确定为hPDLCs。2.在适度的功率和照射时间时,Er:YAG激光对hPDLCs增殖、克隆形成、迁移、TGF-β1分泌具有促进作用。3.在适度的功率和照射时间时,Er:YAG激光对hPDLCs ALP、OCN、Runx2表达具有促进作用。
【关键词】：Er:YAG激光 人牙周膜细胞 细胞增殖 细胞迁移 克隆形成 转化生长因子β1 成骨分化
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.4
【目录】：

• 前言5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-14
• 缩略词表14-16
• 第一章 绪论16-21
• 第二章 hPDLCs的分离培养及鉴定21-26
• 1. 材料与方法21-23
• 2. 实验结果23
• 3. 讨论23-26
• 第三章 Er：YAG激光对hPDLCs增殖和迁移的影响26-41
• 1. 材料与方法26-32
• 2. 实验结果32-39
• 3. 讨论39-41
• 第四章 Er：YAG激光对hPDLCs成骨分化的影响41-55
• 1. 材料与方法41-44
• 2. 实验结果44-52
• 3. 讨论52-55
• 全文总结55-56
• 参考文献56-63
• 附录63-64
• 致谢64-65

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