Neuropilin-1诱导口腔鳞状细胞癌上皮间充质转化及其机制的研究

发布时间：2017-09-13 01:32

  本文关键词：Neuropilin-1诱导口腔鳞状细胞癌上皮间充质转化及其机制的研究

  更多相关文章： NRP1 口腔鳞状细胞癌 上皮间质转化 迁移侵袭 NF-κB

【摘要】：口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤,具有较强的局部浸润和转移能力,恶性程度往往较高。上皮细胞间充质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤的侵袭转移过程中发挥着重要的影响。神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP1)是一种多功能的跨膜糖蛋白,研究表明其表达程度与肿瘤的发生,生长和预后密切相关并且可能参与了某些肿瘤细胞EMT的进程。NRP1诱导口腔鳞状细胞癌发生EMT可能是其侵袭转移性较强的重要原因。研究目的:1.观察NRP1在口腔鳞癌中的表达,评价NRP1表达水平与口腔鳞癌临床病理以及预后的关系。2.明确NRP1上调后口腔鳞癌细胞EMT的发生及生物学行为的改变;3.探讨NRP-1诱导口腔鳞状细胞癌发生EMT的分子生物学机制;材料与方法:1.应用免疫组织化学染色的方法检测60例口腔鳞状细胞癌标本及30例正常口腔粘膜组织标本中NRP1的表达强度、范围;统计分析NRP1表达水平与肿瘤临床病理以及预后的关系。2.利用pcDNA3.1-NRP1真核表达质粒及pcDNA3.1空载质粒转染人口腔鳞癌细胞系CAL27,HN4及HN6,获得稳定高表达NRP1的细胞株(实验组)及相对低表达NRP1的细胞株(对照组)。观察质粒转染后两组细胞的表型的改变;应用RT-RCR和Western Blot方法分别检测两组细胞中NRP1以及上皮和间质标志物mRNA水平和蛋白水平的表达变化;应用划痕实验、Transwell侵袭实验、单克隆形成实验、耐药实验检测NRP1高表达后细胞生物学行为的改变。3.应用RT-RCR和Western Blot方法分别检测两组细胞中NF-κB信号通路相关蛋白的变化。特异性抑制NF-κB信号通路活性,观察细胞的EMT进程能否被逆转。结果:1.免疫组织化学染色显示:60例口腔鳞状细胞癌标本中均检测出NRP1表达,而30例正常组织中仅6例检测出NRP1表达,显示NRP1在肿瘤组织中呈现高表达(p0.001);NRP1的表达与口腔鳞癌的淋巴结转移率密切相关(p0.05);生存分析表明NRP1高表达组总体生存率明显低于低表达组患者(p0.05)。2.NRP1高表达诱导口腔鳞癌细胞系发生了明显的EMT,表现为细胞形态学的改变,上皮标志物E-cadherin和β-catenin表达下降,间质标志物vimentin和N-cadherin表达上升。细胞的迁移、侵袭、增殖能力以及耐药性显著增强,细胞发生EMT导致迁移侵袭性增强的同时获得了一定的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)样特性。3.NF-κB信号通路在NRP1诱导的口腔鳞癌细胞EMT进程中呈现激活状态,特异性抑制NF-κB信号通路活性,可逆转NRP1高表达肿瘤细胞的EMT进程,并减弱其迁移、侵袭能力。结论:本实验证明NRP1在口腔鳞状细胞癌组织中呈高表达,与肿瘤的淋巴结转移率及患者的生存率密切相关。NRP1可通过激活NF-κB信号通路诱导口腔鳞癌细胞发生EMT,增强其迁移侵袭能力的同时使其获得一定的CSC样特性。特异性抑制NF-κB信号通路活性,可逆转NRP1所诱导的口腔鳞癌细胞EMT进程,并减弱细胞的迁移、侵袭能力。
【关键词】：NRP1 口腔鳞状细胞癌 上皮间质转化 迁移侵袭 NF-κB
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.85
【目录】：

• 缩略词表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一部分NRP1在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义14-22
• 1 材料和方法14-18
• 2 结果18-20
• 3 讨论20-22
• 第二部分NRP1诱导口腔鳞癌细胞上皮间充质转化并改变其生物学行为22-43
• 1 材料和方法23-34
• 2 结果34-39
• 3 讨论39-43
• 第三部分NRP1诱导口腔鳞癌细胞上皮间充质转化的机制探究43-52
• 1 材料和方法43-45
• 2 结果45-50
• 3. 讨论50-52
• 参考文献52-57
• 文献综述57-68
• 参考文献62-68
• 攻读学位期间发表文章情况68-69
• 致谢69

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本文编号：840736