对神经嵴干细胞潜在的成牙特性的研究

发布时间：2017-09-23 22:11

  本文关键词：对神经嵴干细胞潜在的成牙特性的研究

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【摘要】：目的:近年来,牙齿的发育以及干细胞理论的牙齿再生技术成为人们研究的热点,而神经嵴干细胞(NCSCs)是一类多能的干细胞胚胎的细胞群,有助于各种颅面结构包括牙齿的形成,对于干细胞生物学和再生医学是一项重要的发展。通过动物实验,观察神经嵴干细胞的潜在成牙特性,为组织工程化牙齿的体内构建探寻新的再生资源与环境。方法:选择健康成年ICR孕鼠1-3只,体重约20 g~25 g,怀孕时间8.5 d。在体视显微镜下从该孕鼠的胚胎中分离出第4-6体节,使所取颅神经管中迁移出神经嵴干细胞,对细胞进行培养与传代。用免疫荧光法对所取细胞进行组织学鉴定,从而为观察神经嵴干细胞的潜在成牙特性提供理论依据。结果:1.实验过程中标本的形态学观察:在体视显微镜下观察到ED8.5孕鼠子宫和胚胎。成功截取胚胎第4-6神经节,并分离出颅神经管结构。证明获取的小鼠颅神经管正常可用。2.神经嵴干细胞的显微镜下观察:培养细胞到第2天时,在显微镜下可见神经嵴干细胞从颅神经管边缘迁移出来,围绕颅神经管生长,细胞形态为梭状形,胞核中等,胞质丰富。同时还观察了培养细胞到第4天,以及传代至第2代培养到第2天时的形态。证明神经嵴干细胞的培养与传代均正常。3.免疫荧光实验的结果:将培养的第3代神经嵴干细胞进行免疫荧光鉴定,荧光显微镜显示结果为:特异性抗体P75,HNK-1,AP2α为阳性;分化抗体PAX6,SOX2为阴性。证明神经嵴干细胞的均一稳定状态。4.体外诱导成牙预实验的结果:原位杂交技术,免疫荧光方法检测成牙潜能相关基因PAX9,FGF10,BMP4等的表达。采用基因插入GFP使细胞定位,显示神经嵴干细胞紧密围绕上皮组织生长,证明其特性与牙源性间充质细胞相似。结论:1.建立了稳定的神经嵴干细胞分离方法,采用无血清培养基可传代培养。2.神经嵴干细胞在形态、基因表达、特异性蛋白标记的检测等方面均获得稳定的表达结果。
【关键词】：组织工程 颅神经管 神经嵴干细胞 牙齿再生
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R78
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-17
• 1. 干细胞技术与牙齿再生的研究现状10-13
• 2. 神经嵴干细胞对牙齿形成作用的研究现状13-14
• 3. 免疫荧光技术在口腔医学中的应用14-16
• 4. 本研究的目的和意义16-17
• 材料与方法17-24
• 1．实验材料17-18
• 1.1 主要实验仪器及设备17
• 1.2 主要实验试剂17-18
• 1.3 实验动物18
• 2．实验方法18-24
• 2.1 实验前期主要材料的准备18-19
• 2.2 实验模型的建立19-22
• 2.3 实验后观察指标22-24
• 结果24-26
• 1. 实验过程中标本的形态学观察24
• 2. 神经嵴干细胞的显微镜下观察24
• 3. 免疫荧光实验的结果24-25
• 4. 体外诱导成牙预实验的结果25-26
• 讨论26-31
• 1. 小鼠胚胎的选择26-27
• 2. 神经嵴干细胞的形态27-28
• 3. 免疫荧光标志物的选择28-29
• 4. 实验创新之处29-31
• 结论31-32
• 参考文献32-38
• 附录一 英文缩略语词表38-39
• 附录二 附图及说明39-45
• 在校期间发表论文及参加学术活动45-46
• 致谢46

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本文编号：907727