沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立

发布时间：2017-09-24 07:46

  本文关键词：沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立

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【摘要】：目的:设计并构建α-catulin-shRNA表达载体,建立沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌(TSCC),TSCCA细胞模型并观察其沉默效率,为TSCC的基因治疗提供依据。方法:TSCCA细胞分为转染组(转染shcatu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4质粒)、阴性对照组(转染sh-nc质粒)及空白对照组(未处理)。根据GenBank上获取的α-catulin mRNA序列,设计并合成4条α-catulin-shRNA质粒表达载体。测序鉴定后,经脂质体介导,将3组质粒分别转染至体外培养的人TSCCA细胞中,荧光显微镜观察各组TSCCA细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;采用RT-PCR和Western blotting法检测TSCCA细胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相对表达水平及沉默效率。结果:测序鉴定表明成功构建了编码α-catulin的shRNA质粒表达载体sh-catu1、shcatu2、sh-catu3和sh-catu4;转染TSCCA细胞后,荧光显微镜下观察到表达载体在细胞中成功表达。RT-PCR检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA表达水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA相对表达水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P0.05),沉默效率升高(P0.05)。结论:成功构建α-catulin-shRNA重组质粒载体,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA细胞模型,为研究α-catulin基因在TSCC发病机制中的作用提供了细胞模型。
【作者单位】： 辽宁医学院附属第一医院口腔科;
【关键词】： 癌 鳞状细胞 舌肿瘤 α-catulin基因 TSCCA细胞 细胞转染
【基金】：辽宁省科技厅自然科学基金资助课题(2015020333)
【分类号】：R739.86
【正文快照】： 口腔鳞状细胞癌(oral squamous cellcarcinoma,OSCC)是世界上常见的恶性肿瘤,占口腔癌总数的90%以上[1],其中舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)为最常见的OSCC。目前TSCC的治疗多采用以手术治疗为主、术后辅以放化疗的综合治疗方法,但效果并不理想,预后较差,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王晓峰;孔晨飞;王伟;张天夫;;Syndecan1慢病毒干涉质粒的构建及其对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响[J];中国实验诊断学;2015年09期

2 Lan Zou;Tian-Run Liu;An-Kui Yang;;Metabolic syndrome is associated with better prognosis in patients with tongue squamous cell carcinoma[J];Chinese Journal of Cancer;2015年04期

3 史毅;吴伟忠;金晓红;张斌;;α-catulin和E-cadherin在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J];吉林大学学报(医学版);2014年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 韩春耀;张斌;马雪;刘明媛;薛中原;郝丽静;葛树卿;;沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立[J];吉林大学学报(医学版);2016年03期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 尚静;房宁;滕思莹;崔香艳;汪欣;;喉鳞状细胞癌组织中Snail和E-cadherin的表达及其意义[J];吉林大学学报(医学版);2012年02期

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本文编号：910217