骨髓间充质干细胞联合血管内皮祖细胞修复骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的研究

发布时间：2017-09-25 07:10

  本文关键词：骨髓间充质干细胞联合血管内皮祖细胞修复骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的研究

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【摘要】：研究背景:目前,由于口腔颌面部肿瘤或外伤引起的口腔内牙槽骨缺损一直是口腔医学研究的重点,因此备受关注。伤口大小影响骨缺损的修复效果,如果缺损范围超过成骨组织的愈合能力,那么缺损主要由纤维结缔组织修复。目前主要有自体以及异体骨移植来修复缺损,但因术后并发症等问题有一定的局限性。因组织工程技术的不断发展,为骨缺损修复提供了新的方法和思路。该实验通过构建骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSCs)与血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)复合细胞膜片来修复牙槽骨缺损,通过构建BMMSCs/EPCs膜片,采用Micro-CT扫描等检测技术,为提高牙槽骨缺损修复效果奠定理论基础,并创建骨组织缺损修复的新思路。研究目的:评价骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合血管内皮祖细胞(EPCs)构建的复合膜片修复骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的能力,研究修复牙槽骨缺损的新方法。研究内容:(1)经密度梯度离心法结合贴壁法获得的BMMSCs与EPCs经倒置显微镜观察细胞形态以及流式细胞仪检测BMMSCs与EPCs表面分子表达情况,并对BMMSCs进行成骨成脂诱导,检测其多项分化能力。(2)将BMMSCs与EPCs直接共培养,经成膜诱导液诱导约10天成膜,对膜片进行固定后切片,进行HE、ALP染色,对细胞膜片行组织学观察。(3)制备骨质疏松大鼠牙槽骨缺损模型,将细胞膜片植入或不植入作为对照,并对标本进行Micro-CT扫描以及BV/TV检测,观察牙槽骨缺损处成骨情况。研究方法:本实验以卵巢摘除大鼠(OVX大鼠)作为绝经后骨质疏松模型。将体外培养扩增的BMMSCs与EPCs、EPCs以及BMMSCs分别按照比例滴加至六孔板上,用α-MEM培养液培养,24小时后换用成膜诱导液培养,10天后形成细胞膜片。制备骨质疏松大鼠上颌牙槽骨缺损,将制备好的BMMSCs/EPCs膜片、BMMSCs膜片与EPCs膜片植入骨质疏松大鼠牙槽骨缺损处,或不植入作为空白对照。术后2周、4周、8周分别取材,通过Micro-CT扫描分析等方法,评价细胞膜片在牙槽骨缺损处的修复效果。研究结果:将细胞诱导10天后可得细胞膜片,BMMSCs/EPCs膜片钙化结节表达情况高于单一BMMSCs膜片以及EPCs膜片。在植入BMMSCs/EPCs膜片8周后,牙槽骨缺损基本修复完成。BMMSCs膜片组、EPCs膜片组以及空白对照组牙槽骨缺损未完全修复,仍有不同程度的缺损。BMMSCs/EPCs膜片组修复效果优于单一BMMSCs膜片以及EPCs膜片。结论:BMMSCs/EPCs复合膜片相对于单一的BMMSCs膜片以及单一的EPCs膜片具有更强的成骨活性以及骨修复能力。
【关键词】：干细胞 组织工程 细胞膜片 骨髓间充质干细胞 血管内皮祖细胞 血管化 成骨诱导 成膜诱导 直接共培养
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R782
【目录】：

• 缩略语表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-24
• 一、骨髓间充质干细胞14-16
• 二、骨质疏松大鼠16-18
• 三、血管内皮祖细胞18-20
• 四、细胞膜片技术20-22
• 五、骨缺损修复22-24
• 第一部分 骨质疏松大鼠模型建立及BMMSCs与EPCs的分离培养与鉴定24-32
• 1 材料24-25
• 1.1 实验动物24
• 1.2 实验材料24
• 1.3 实验仪器24-25
• 2 方法25-27
• 2.1 骨质疏松大鼠模型的建立25
• 2.2 BMMSCs与EPCs的分离培养25-26
• 2.3 BMMSCs与EPCs的鉴定26
• 2.3.1 BMMSCs表面抗原流式细胞仪检测26
• 2.3.2 EPCs表面抗原流式细胞仪检测26
• 2.4 BMMSCs多向分化能力检测26-27
• 2.4.1 BMMSCs成骨分化能力的鉴定26
• 2.4.2 BMMSCs成脂分化能力的鉴定26-27
• 3 结果27-30
• 3.1 骨质疏松症大鼠模型的建立检测27-28
• 3.2 BMMSCs以及EPCs形态观察28
• 3.3 BMMSCs表面抗原流式细胞仪检测28-29
• 3.4 EPCs表面抗原流式细胞仪检测29
• 3.5 BMMSCs成骨成脂分化能力的鉴定29-30
• 4 讨论30-32
• 第二部分 细胞膜片制备以及膜片相关检测32-38
• 1 材料32
• 1.1 实验材料32
• 1.2 实验仪器32
• 2 方法32-33
• 2.1 分离培养BMMSCs，，EPCs32
• 2.2 制备细胞膜片32-33
• 2.2.1 BMMSCs/EPCs膜片的制备32
• 2.2.2 BMMSCs膜片的制备32-33
• 2.2.3 EPCs膜片的制备33
• 2.3 BMMSCs/EPCs直接共培养，细胞标记液分别标记BMMSCs/EPCs33
• 2.4 BMMSCs/EPCs膜片、EPCs膜片以及BMMSCs膜片的检测33
• 3 结果33-36
• 3.1 BMMSCs与EPCs直接共培养，细胞标记液分别标记BMMSCs，EPCs33-34
• 3.2 BMMSCs/EPCs膜片、EPCs膜片以及BMMSCs膜片的检测34-36
• 4 讨论36-38
• 第三部分 细胞膜片植入骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的体内研究38-44
• 1 材料38
• 1.1 实验材料38
• 1.2 实验动物38
• 2 方法38-39
• 2.1 实验分组38
• 2.2 大鼠牙槽骨缺损模型的制备及细胞膜片的植入38-39
• 2.3 细胞膜片修复大鼠牙槽骨缺损效果检测39
• 2.4 统计学方法39
• 3 结果39-42
• 3.1 Micro-CT检测及结果分析39-41
• 3.2 骨质疏松大鼠牙槽骨切片HE染色41-42
• 4 讨论42-44
• 小结44-46
• 参考文献46-57
• 个人简历和研究成果57-58
• 致谢58

本文编号：916040