壳聚糖材料对大鼠脂肪间充质干细胞神经分化影响的初步探究

发布时间：2017-09-26 05:05

  本文关键词：壳聚糖材料对大鼠脂肪间充质干细胞神经分化影响的初步探究

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【摘要】：目的：口腔颌面部的外伤、肿瘤和炎症等均可能导致面神经受损,且其自我修复能力较差,因此探讨如何简单有效地修复损伤的面神经是如今口腔颌面外科乃至显微整形外科的热点问题。组织工程技术的出现,为面神经以及其他外周神经的修复带来了新的思路。组织工程即联合生物材料和细胞疗法针对神经变性疾病开发了新的治疗策略。脂肪间充质干细胞(ADSCs)有分化为神经元样细胞的相应属性。壳聚糖材料具有良好的的生物相容性和降解性,且降解产物对人体无明显已知的毒副作用,无免疫原性等特殊生物医学特性,还具有促进组织修复及止血等生物活性,并且它来源广泛,因此它是一种具有广泛前景的神经组织工程材料。本实验通过探究大鼠脂肪间充质干细胞在诱导成神经的过程中,壳聚糖材料对脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)表达的影响,以进一步探讨壳聚糖材料对脂肪间充质干细胞神经分化的影响。方法：CCK-8法测得获取的脂肪间充质干细胞的增殖,并应用免疫组化进行鉴定。采用神经诱导培养基即加入添加了20ng/mLbFGF和 20ng/mLEGF以及2%B27的Neurobas al培养基,诱导ADSCs成神经细胞,诱导所得细胞通过形态学及免疫荧光进行鉴定。CCK-8法测得壳聚糖材料对ADSCs细胞活力的影响。通过实时荧光定量PCR来比较无壳聚糖膜联合培养组和壳聚糖膜联合培养组诱导成神经过程中BDNF表达的差异。结果：原代培养所得细胞的形状为细长梭状,胞核位于中央,贴壁生长,在外形上与BMSCs难以区别；免疫组化检测相关抗原CD90、CD105为阳性和造血干细胞相关抗原CD45为阴性,具有多向分化能力如：成脂、成软骨；并通过增殖曲线看出ADSCs生长活跃,增殖能力强,由于组织来源为脂肪故可确定培养所得细胞为ADSCs。通过神经诱导培养基诱导9天所得神经球免疫荧光染色nestin阳性,神经球吹散进一步诱导分化所得细胞免疫荧光染色MAP-2阳性,结合形态学可基本确定ADSCs已成功诱导分化成神经细胞。CCK-8的结果表明壳聚糖材料应用与否对ADSCs的增殖没有明显影响,组间差异无统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR中SYBRGreen I法分析了在ADSCs成神经诱导分化过程中应用壳聚糖膜与否对于脑源性神经营养因子(BDNF)的表达变化的影响,ADSCs的神经分化潜能用BDNF的量变进行了评价。实时荧光定量PCR测得对照组(未应用壳聚糖膜)在诱导成功后的BDNFmRNA表达值为1.16556,实验组(应用壳聚糖膜)在诱导成功后的BDNFmRNA表达值为2.66166。且对照组和实验组之间BDNF mRNA表达值差异较明显,实验组表达值高于对照组,为对照组的2.28倍(P0.05)。结论：ADSCs生长活跃,表现出稳定的增长及增殖动力,并可定向诱导分化为脂肪细胞、软骨细胞以及神经细胞,实验就分化后的细胞在形态、表型层面进行了分析,可发现细胞分化成神经细胞后表现出了显著变化；壳聚糖生物材料的应用影响ADSCs诱导分化成神经细胞过程中BDNF因子的表达变化,进一步说明壳聚糖生物材料有利于ADSCs诱导分化成神经细胞,并且由于它具有较高的亲和性,故可以成为治疗神经系统损伤体内修复的理想材料。
【关键词】：脂肪间充质干细胞 神经细胞 壳聚糖材料 脑源性神经营养因子
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783.1
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-12
• 第一章 脂肪干细胞的培养及鉴定12-30
• 引言12
• 材料与方法12-20
• 结果分析20-27
• 讨论27-30
• 第二章 脂肪干细胞向神经细胞方向的诱导分化30-39
• 引言30
• 材料与方法30-33
• 结果33-37
• 讨论37-39
• 第三章 壳聚糖膜的制作及其与ADSCs的相容性研究39-47
• 引言39-40
• 材料与方法40-42
• 结果42-44
• 讨论44-47
• 第四章 成神经诱导分化过程中ADSCs与壳聚糖膜共培养后脑源性神经营养因子的变化47-57
• 引言47
• 材料与方法47-52
• 结果52-54
• 讨论54-57
• 全文结论57-58
• 参考文献58-62
• 中英文对照表62-63
• 致谢63-64
• 脂肪干细胞的研究进展及前景(综述)64-78
• 参考文献72-78

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本文编号：921601