渐进性咬合紊乱导致大鼠TMJ-OA髁突软骨中Ihh及其受体表达变化的研究

发布时间：2017-09-29 16:26

  本文关键词：渐进性咬合紊乱导致大鼠TMJ-OA髁突软骨中Ihh及其受体表达变化的研究

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【摘要】：颞下颌关节紊乱病(Temporomandibular Disorders,TMD)是口腔颌面部的常见病和多发病,颞下颌关节骨关节炎(TMJ osteoarthritis,TMJ-OA)是颞下颌关节紊乱病的重症表现形式。对于TMJ-OA的发病机制目前认识尚不清楚,有研究表明关节区异常力学的改变可能是TMJ-OA的致病因素之一,咬合异常引起关节受力发生变化,进而引起力敏感的相关因子的表达发生变化。印度刺猬基因(Indian Hedgehog,Ihh)是一个与力相关的基因,当力发生改变时,Ihh基因就会随之发生改变。因此本研究建立了SD大鼠的TMJ-OA动物模型,通过HE染色确定了SD大鼠的TMJ-OA动物模型的髁突软骨的病理特征,通过免疫组化染色和实时聚合酶链式反应从蛋白和基因水平检测Ihh,Smo和Ptc1的表达变化特征,以期为进一步研究TMJ-OA的提供实验基础。实验方法:选择本校动物实验中心24只8周龄雌性SD大鼠,随机平均分为实验组和对照组。实验组大鼠右下及左上第一磨牙与第二磨牙之间;第二磨牙与第三磨牙之间分别分牙,对照组大鼠与实验组大鼠在相同环境下饲养,模拟分牙处理。当实验进行到20周和24周时,处死SD大鼠(实验组与对照组各6只),取材。左侧髁突组织块常规固定,脱钙,脱水,石蜡包埋,近远中方向纵行切片,进行HE和免疫组化染色。右侧髁突软骨组织提取总RNA并用Real-Time PCR方法检测Ihh、Smo和Ptc1的m RNA表达变化。实验结果:1.HE染色结果表明,实验组髁突软骨20周时出现明显的TMJ-OA样改变,主要表现为髁突软骨细胞排列不整齐、细胞层不清、显微骨裂、出现无细胞区和钉突样结构,在第24周时这些病变有所改善。2.免疫组化染色结果显示,与对照组相比,第20周时实验组的Smo蛋白水平表达显著升高(P0.05);第24周时Ihh的实验组蛋白表达水平显著升高(P0.05);其余各组间差异无统计学意义。3.Real-Time PCR检测结果表明,Ihh和Smo在20周时,实验组的表达均显著高于对照组(P0.05);Ihh在24周时,实验组的表达明显高于对照组(P0.05),其余三组基因水平表达在实验组与对照组之间没有统计学差异。实验结论:1.通过正畸皮圈分牙移动SD大鼠磨牙的方法成功建立了渐进性咬合紊乱动物模型。2.颞下颌关节渐进性咬合紊乱所致的软骨异常改建促进了Ihh和Smo基因的高表达。
【关键词】：软骨 颞下颌关节 骨关节炎 印度刺猬基因
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R782.6
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 文献回顾12-23
• 1. 颞下颌关节与生物力12-14
• 1.1 颞下颌关节髁突软骨12-13
• 1.2 髁突软骨与生物力13-14
• 2. 颞下颌关节紊乱病14-18
• 2.1 颞下颌关节紊乱病与异常咬合15-16
• 2.2 颞下颌关节骨关节炎的实验方法16-18
• 3. Hh信号通路18-23
• 3.1 Ihh与软骨细胞的增殖分化20-21
• 3.2 Ihh与TMJ生物力学21-23
• 第一部分 建立SD大鼠TMJ-OA动物模型23-32
• 1 材料24
• 1.1 实验动物的选择与分组24
• 2 方法24-26
• 2.1 建立SD大鼠TMJ-OA动物模型实验的操作方法24-25
• 2.2 大体观察25
• 2.3 苏木精-伊红（HE）染色25-26
• 2.4 统计方法26
• 3 结果26-29
• 3.1 大体观察结果26-27
• 3.2 苏木精-伊红（HE）染色结果27-29
• 3.3 髁突全层软骨厚度微观测量结果29
• 4 讨论29-31
• 5 结论31-32
• 第二部分 蛋白及基因水平检测Ihh及受体在TMJ-OA髁突组织的变化32-45
• 1 材料32-33
• 1.1 实验动物的选择与分组32-33
• 2 方法33-36
• 2.1 SD大鼠TMJ-OA动物模型实验的操作方法33
• 2.2 免疫组化染色33-34
• 2.3 Real Time-PCR检测34-36
• 2.4 统计方法36
• 3 结果36-43
• 3.1 Ihh蛋白水平的表达36-37
• 3.2 Smo蛋白水平的表达37
• 3.3 Ptc1蛋白水平的表达37
• 3.4 Ihh mRNA水平的表达37
• 3.5 Smo mRNA水平的表达37
• 3.6 Ptc1 mRNA水平的表达37-43
• 4 讨论43-44
• 5 结论44-45
• 小结45-46
• 参考文献46-59
• 个人简历和研究成果59-60
• 致谢60

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本文编号：943071