MT01抑制牙周炎患者自身组织核酸刺激RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达

发布时间：2017-10-01 20:11

  本文关键词：MT01抑制牙周炎患者自身组织核酸刺激RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达

  更多相关文章： 特定序列寡核苷酸MT01 牙周炎患者自身组织核酸 损伤相关 模式分子 破骨相关因子 RAW264.7

【摘要】：牙周炎是一种由于局部免疫失衡导致的牙周组织破坏性疾病，疾病的进展和严重程度与宿主自身的免疫性炎症反应密切相关。在牙周疾病免疫炎症反应过程中，牙周自身组织核酸不仅参与牙周疾病的发展，而且有可能成为牙周炎发生机制的关键因素并起到调控作用。自身组织来源的核酸分子属于核酸类损伤相关模式分子(damage-associated molecular patterns molecules,DAMPs)，是“内源性危险信号”(endogenous danger signal)。研究证实，核酸类DAMPs能启动以产生大量炎性细胞因子为特征的固有免疫反应。对机体而言，这类固有免疫应答反应是“双刃剑”，既可快速有效的控制细菌感染，又可在过度激活的状态下引起炎症性病理损伤，这种炎症性病理损伤在牙周疾病中主要表现为炎性牙槽骨吸收。整合以上研究线索，我们推论，在牙周疾病的发展中，牙周炎患者自身组织核酸可能作为一类DAMPs，通过过度激活牙周局部固有免疫应答反应，引发炎性牙槽骨吸收。 为证实这一推论，首先，本研究采用慢性牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7，检测细胞内破骨相关因子mRNA表达水平，发现炎性牙周组织核酸可促进破骨细胞活化，说明，牙周炎患者自身组织核酸可能通过对破骨相关因子基因表达水平的上调，参与牙周局部固有免疫应答反应，，导致牙槽骨吸收。 其次，我们选用免疫抑制剂MT01（一种依据人线粒体DNA序列设计的单链寡脱氧核苷酸），对牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7进行干预，结果发现，牙周炎患者自身组织核酸对破骨细胞活化的激活受免疫抑制剂的抑制，进一步证实，牙周炎患者自身组织核酸可能作为一类DAMPs参与牙周炎的发生，导致炎性牙槽骨吸收。 方法采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎症牙周组织以及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织，提取组织总RNA逆转录cDNA。培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7，加入质量浓度1μg mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3h后（以1μg mL-1的PBS作为对照），加入已提取的炎症牙周组织及健康牙周组织cDNA（质量浓度为1μg mL-1）。实验分4组：健康组织cDNA，炎症组织cDNA，MT01+健康组织cDNA，MT01+炎症组织cDNA。4组细胞分别孵育3、6、12、24小时，采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表达，进行两两组间比较。 结果牙周炎患者自身组织核酸可上调RAW264.7内破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表达；在免疫抑制剂MT01的作用下，牙周炎患者自身组织核酸对RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达受到抑制。 结论牙周炎患者自身组织核酸对破骨细胞活化的激活作用可能是其作为牙周局部组织内DAMPs的依据；免疫抑制剂MT01对牙周炎患者自身组织核酸刺激RAW264.7内破骨相关因子mRNA表达的抑制作用，可以提示，牙周炎患者自身组织核酸可能参与牙周局部免疫应答反应。
【关键词】：特定序列寡核苷酸MT01 牙周炎患者自身组织核酸 损伤相关 模式分子 破骨相关因子 RAW264.7
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.42
【目录】：

• 中文摘要4-7
• abstract7-13
• 英文缩略词表13-14
• 第1章 绪论14-17
• 第2章 文献综述17-21
• 2.1 DAMPS 与牙周炎症免疫应答关系的研究进展17-19
• 2.2 MT01 在牙周炎症免疫应答的中作用的相关研究进展19-21
• 2.2.1 MT01 概述19-20
• 2.2.2 MT01 在牙周炎症免疫应答的中作用20-21
• 第3章 实验研究21-31
• 3.1 实验仪器和试剂21-22
• 3.1.1 主要材料和试剂21
• 3.1.2 主要仪器和设备21-22
• 3.1.3 试剂配制22
• 3.2 选择研究对象22-24
• 3.2.1 慢性牙周炎的纳入标准与研究对象23
• 3.2.2 健康组纳入标准与研究对象23-24
• 3.2.3 排除标准24
• 3.3 牙周检查24-25
• 3.4 收集牙周标本并提取组织 RNA 及逆转录成 CDNA25-27
• 3.4.1 提取牙周组织 RNA：26-27
• 3.4.2 逆转录反应（RT）：27
• 3.5 小鼠单核/巨噬细胞的培养27-28
• 3.6 实验分组28
• 3.7 提取细胞总 RNA 及逆转录成 CDNA28-29
• 3.7.1 提取细胞总 RNA28-29
• 3.7.2 逆转录反应（RT）：方法同前29
• 3.8 实时定量 PCR 检测破骨相关因子的表达29-30
• 3.9 数据整理与统计学分析30-31
• 第4章 实验结果31-35
• 4.1 无 MT01 干预状态下，牙周炎患者自身组织核酸可上调 RAW264.7 内破骨相关因子 MRNA 的表达31-32
• 4.2 MT01 可抑制牙周炎患者自身组织核酸刺激 RAW 264.7 内破骨相关因子 MRNA 的表达32-33
• 4.3 在牙周炎患者组内，MT01 同样抑制自身组织核酸对 RAW264.7 内破骨相关因子 MRNA 的表达33-35
• 第5章 讨论35-39
• 5.1 破骨细胞及破骨相关因子的概论35-36
• 5.2 MT01 对牙周炎患者自身组织核酸对破骨细胞活化调控的影响36-39
• 第6章 结论39-40
• 参考文献40-45
• 附录45-47
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果47-49
• 致谢49

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