BMP-2对人牙周膜细胞成骨和成牙骨质向分化的初步研究

发布时间：2017-10-05 18:28

  本文关键词：BMP-2对人牙周膜细胞成骨和成牙骨质向分化的初步研究

  更多相关文章： 人牙周膜细胞 BMP-2 分化

【摘要】：目的本研究拟通过体外实验比较不同BMP-2浓度对人牙周膜细胞向成牙骨质和成骨质方向分化差异的影响,来探讨BMP-2影响人牙周膜细胞分化的机制。同时,研究BMP-2与细胞的作用时间和分化的关系,以及是否存在最佳刺激时程。从而为牙周组织再生治疗中BMP-2的临床应用提供理论依据。方法1.hPDLCs的培养:采用组织块培养法培养原代hPDLCs,观察细胞形态并绘制生长曲线。2.hPDLCs的鉴定:采用流式细胞仪分析目标细胞表型;免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源。3.hPDLCs增殖能力的研究:采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。4.hPDLCs成牙骨质分化的研究:采用荧光定量PCR检测BMP-2处理后hPDLCs中CAP mRN表达水平上的改变;利用Western blot检测BMP-2处理后hPDLCs中CAP、CP-23蛋白水平的变化。5.hPDLCs成骨分化的研究:采用荧光定量PCR检测BMP-2处理后hPDLCs中RUNX2和COL-1 mRNA表达水平上的改变;利用Western blot检测BMP-2处理后hPDLCs中EGFR和COL-1蛋白水平的变化。结果1.所培养的hPDLCs具有细胞干性,增殖能力强,生长活性好。2.BMP-2对hPDLCs增殖能力的影响:流式细胞周期的结果显示,92.31%的细胞在静止期和DNA合成前期(G0/G1期)。3.BMP-2对hPDLCs成牙骨质向分化能力的影响:1)荧光定量PCR结果发现,20ng/ml BMP-2作用下,CAP mRNA表达量明显增高,在第5天达到峰值,差异有统计学意义(p0.05);2)Western blot结果显示,20 ng/ml和100 ng/ml BMP-2作用下hPDLCs中CAP和CP-23表达量相对较高,差异有统计学意义(p0.05)。4.BMP-2对hPDLCs成骨向分化能力的影响:1)荧光定量PCR结果发现,80ng/ml BMP-2作用下,COL-1 mRNA表达量明显增高,在第7天达到峰值,差异有统计学意义(p0.05);100ng/ml BMP-2作用下,RUNX2 mRNA表达量明显增高,随时间逐渐升高,差异有统计学意义(p0.05);2)Western blot结果显示,100ng/ml的BMP-2作用下,EGFR和COL-1表达量明显上升,差异有统计学意义(p0.01)。结论1.BMP-2对hPDLCs成牙骨质和成骨方向分化具有上调作用。BMP-2在低浓度(20ng/ml)时促进hPDLCs向成牙骨质方向分化,BMP-2在较高浓度(100ng/ml)作用下促进了成骨方向的分化。2.BMP-2刺激的时间对hPDLCs的影响也具有统计学意义(p0.05),存在最佳刺激时程。成牙骨质分化在第5天达到峰值,成骨方向分化在第7天达到峰值。这对临床确定BMP-2的疗程是有价值的。
【关键词】：人牙周膜细胞 BMP-2 分化
【学位授予单位】：中山大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781.4
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 一、前言9-15
• 1.1 研究背景9-10
• 1.2 牙周组织工程10-15
• 二、实验材料15-18
• 2.1 组织材料来源15
• 2.2 本研究主要试剂、耗材及器械15-18
• 三、实验方法18-28
• 3.1 hPDLCs的原代培养和鉴定18-20
• 3.2 多向分化能力检测20-28
• 四、实验结果28-37
• 4.1 hPDLCs的培养28-29
• 4.2 hPDLCs的鉴定29-31
• 4.3 BMP-2对细胞凋亡和周期的影响31-32
• 4.4 BMP-2诱导牙周膜细胞分化32-37
• 五、讨论37-40
• 5.1 牙周膜细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）37-38
• 5.2 BMP-2对hPDLCs成牙骨质分化的影响38
• 5.3 BMP-2对hPDLCs成骨分化的影响38-40
• 六、结论40-41
• 参考文献41-43
• 成果43-44
• 致谢44

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王宇,钱凤兰,汪平,杨亚宁,郝建军;碱性成纤维细胞生长因子对培养的人牙周膜细胞增殖和分化的作用[J];第四军医大学学报;2003年23期

2 毛钊,杨俭,毛曦,苏寒;甲壳胺对人牙周膜细胞增殖和分化的影响[J];中国海洋药物;2005年02期

3 杨磊,李东,丁寅,李永明;体外培养人牙周膜细胞成骨基因表达谱的检测[J];临床口腔医学杂志;2005年11期

4 王静;唐荣银;史俊南;王捍国;杜岩;;十二烷基硫酸钠对人牙周膜细胞活性影响的实验研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2005年12期

5 毛钊;杨俭;毛曦;苏寒;;甲壳胺对老年人牙周膜细胞分化功能的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年03期

6 李永明;杨磊;丁寅;李东;;周期性牵张力调节人牙周膜细胞成骨相关基因表达的研究[J];中华口腔医学杂志;2007年06期

7 石瑾;武云霞;;神经生长因子对人牙周膜细胞增殖与分化作用的研究[J];山西医科大学学报;2007年11期

8 刘泉;莫安春;;钇-羟基磷灰石纳米微粒对人牙周膜细胞生物学行为的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年03期

9 徐凌;黄姣;向学熔;;成骨生长肽对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响[J];重庆医科大学学报;2009年04期

10 毛钊;尹英;毛曦;储成林;;老年人牙周膜细胞附着于纳米-羟基磷灰石上的形态学观察[J];医学研究生学报;2009年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 毛钊;尹英;毛曦;储成林;;老年人牙周膜细胞附着于纳米-羟基磷灰石上的形态学观察[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年

2 张丁;杨雁琪;李小彤;傅民魁;;机械力对人牙周膜细胞分化的影响[A];第四军医大学口腔医院2004第七届全国口腔正畸学术会议论文汇编[C];2004年

3 毛钊;杨俭;吴织芬;;老年人牙周膜细胞增殖的比较研究[A];中华口腔医学会第二次全国会员代表大会暨第七次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];2001年

4 刘士有;白红敏;;一氧化氮对人牙周膜细胞增殖抑制作用的研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年

5 史亮;施生根;韩东;孙全梅;;人牙周膜细胞内一氧化氮对力学响应单细胞水平的动态研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

6 李茵;温颖;郑东翔;梁海咏;朴文花;;机械应力对人牙周膜细胞炎症因子表达谱影响的分析[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

7 李彦;牛忠英;汤楚华;;不同培养条件下胰岛素样生长因子-Ⅰ对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

8 高颖;林崇韬;;尼古丁对人牙周膜细胞增殖及纤维结合蛋白合成的影响[A];中华口腔医学会老年口腔医学专业委员会换届选举暨第四届全国老年口腔医学学术研讨会论文汇编[C];2008年

9 张凤秋;孟焕新;;Emdogain对人牙周膜细胞生物学影响的体外研究[A];第七届全国口腔黏膜病暨第五届口腔中西医结合大会论文汇编[C];2008年

10 刘长虹;杨晓喻;梁星;孙俊;;不同钛表面对人牙周膜细胞功能和细胞周期的影响[A];第六届全国口腔种植学术会议论文汇编[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 李敏;高糖对人牙周膜细胞骨向分化的影响[D];武汉大学;2014年

2 张云飞;人牙周膜细胞在弹性牵张力作用下核心结合因子的表达[D];第四军医大学;2002年

3 李长霞;miRNAs靶向调节人牙周膜细胞骨向分化中PLAP-1基因表达研究[D];南方医科大学;2012年

4 谢晓莉;LTA及LPS对人牙周膜细胞凋亡和炎性细胞因子的影响[D];中南大学;2010年

5 孙卫斌;纳米羟基磷灰石诱导人牙周膜细胞骨化分化的研究[D];四川大学;2005年

6 赵艳红;Osterix在正畸牙周组织改建中的表达及调控机制研究[D];山东大学;2008年

7 蒋一;Periostin在高糖条件下牙周组织中的表达及胰岛素干预调控的研究[D];中国人民解放军医学院;2013年

8 原工杰;孕激素受体在人牙周膜细胞中的表达及孕酮对细胞增殖和成骨分化影响的研究[D];第四军医大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨宾;658nm低能量激光照射对人牙周膜细胞生物学活性的影响[D];福建医科大学;2011年

2 李军;富血小板纤维蛋白对人牙周膜细胞体外增殖及分化的影响[D];吉林大学;2013年

3 张燕青;转化生长因子-β_1和神经生长因子对人牙周膜细胞增殖和分化的生物学作用[D];山西医科大学;2010年

4 赵弼洲;淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响[D];兰州大学;2011年

5 詹雪灵;乳铁蛋白对脂多糖诱导的人牙周膜细胞炎症免疫反应的影响[D];南方医科大学;2014年

6 沈舒宁;尼古丁和/或α-银环蛇毒素对人牙周膜细胞基质金属蛋白酶表达影响的研究[D];第四军医大学;2011年

7 赵华;Emdogain、辛伐他汀及两者联合应用对人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响[D];郑州大学;2007年

8 王旋;寡核苷酸MTO1进入人牙周膜细胞的时相观察[D];吉林大学;2014年

9 蒋欣益;低强度脉冲超声波联合骨形成蛋白2对人牙周膜细胞成骨诱导效应的研究[D];重庆医科大学;2013年

10 王佳;黄岑苷对H-2O_2诱导人牙周膜细胞损伤后作用的研究[D];重庆医科大学;2015年

，

本文编号：978115