变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

发布时间：2017-10-08 22:02

  本文关键词：变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

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【摘要】：目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性。结果成功扩增出大小为269bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍。结论成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础。
【作者单位】： 厦门大学附属第一医院暨福建医科大学厦门市第一教学医院检验科;福建医科大学第一临床医学院;厦门市中心血站;
【关键词】： 变异链球菌 ldh基因 启动子
【基金】：国家自然科学基金(No.81000762) 福建省自然科学基金(No.2015J0155,2013D002)联合资助~~
【分类号】：R780.2
【正文快照】： (1.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Xiamen University,Xiamen361003,China;2.The First Clinical Medical College of Fujian Medical University,Fuzhou350108,China;3.Xiamen Central Blood Service Station,Xiamen361003,China)变异

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