湖南怀化市乙脑病毒传播循环研究

发布时间：2017-03-28 01:11

  本文关键词：湖南怀化市乙脑病毒传播循环研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：日本脑炎病毒(JEV)是在世界上最重要的病毒性脑炎病原体之一。尽管通过疫苗接种和改善个人卫生,已经大大减少了乙脑病例数量,但它仍然是一个公共卫生问题。研究显示,2006-2009年期间每年全球约有67900例乙脑病例发生,其中50%(约33,900例)发生在中国。我国湖南省自50年代起一直是乙脑的流行区,1951~2000年乙脑年平均发病率为5.82/10万,在2013年7月湖南省公布的乙脑报告病例中,怀化市报告乙脑发病数列居前位。怀化市位于湖南省西部偏南,属中亚热带季风气候区,四季分明,光热资源丰富,雨量充沛,为三带喙库蚊的繁殖提供了良好的孳生环境。近年来,极少有研究针对该地区的乙脑媒介三带喙库蚊的密度、季节消长等生态学特征进行详细调查且对该地区乙脑病毒流行株缺乏深入研究。本研究,通过对怀化地区蚊虫多样性特征、三带喙库蚊种群季节消长、携带病原体情况的调查,了解该地区主要传播媒介的种群分布特征、目前流行的乙脑病毒株的基因型别及分子特征,为该地区乙脑的防控和流行趋势的预测提供重要的基础数据。通过蚊虫种群密度现场调查,掌握了当地蚊虫种群密度及季节消长等资料,运用RT-PCR的方法,分段设计引物、扩增、测序、拼接,得到了蚊和猪体内乙型脑炎病毒序列,采用最大简约法、最大似然法和贝叶斯法,对蚊虫和猪体内分离湖南怀化株病毒基因与目前Genbank中登录的覆盖基因Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和Ⅴ型5个基因型别的乙脑病毒序列进行系统进化分析,获得如下结果。湖南怀化蚊种构成比较简单,三带喙库蚊和中华按蚊均为当地的广布种,特别是在猪圈和人居环境采集的蚊虫以三带喙库蚊构成比最高,占总捕获蚊虫数的94.2%~98.6%。三带喙库蚊活动时间较长,季节分布曲线呈单峰状态,8月下旬出现高峰期,9月上旬密度开始下降。本研究首次从怀化地区自然界乙脑传播循环的关键环节——媒介蚊虫和猪体内分离到乙脑病毒,蚊虫感染乙脑病毒的最低感染率分别为1:3858 and1:2381,猪的乙脑病毒感染率为16.42%,经鉴定,湖南怀化地区蚊虫和猪体内分离的乙脑病毒均为基因Ⅲ型乙脑病毒。新分离蚊虫体内湖南怀化株病毒株与JEV SA14、SA-14株具有基因序列同源性。湖南怀化猪源性JEV病毒株在进化关系上与台湾分离株TIPI、日本分离株Ja GAr01和中国福建分离株YLG株亲缘关系最近。尽管怀化蚊虫体内分离乙脑病毒与SAl4-14-2株氨基酸比对结果显示,在序列E基因区段存在11个氨基酸位点差异,位于E304和E335位点,能影响病毒抗原抗体结合的半胱氨酸则未发生变化,没有发生决定抗原性的关键位点改变,因此怀化株乙脑病毒抗原性与疫苗株SA-14-14-2没有差异,同时,由于乙脑病毒抗原性相关的关键位点未发生改变,因此理论上当前使用的疫苗株SA-14-14-2能够保护我国湖南怀化株乙脑病毒的感染。新分离蚊虫体内湖南怀化株株乙脑病毒与JEV SA14、SA-14株具有基因序列同源性。湖南怀化猪源性JEV病毒株在进化关系上与台湾分离株TIPI、日本分离株Ja GAr01和中国福建分离株YLG株亲缘关系最近。
【关键词】：三带喙库蚊 乙型脑炎 湖南 中国
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.32;R181.3
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料和方法13-26
• 1.实验材料13-15
• 1.1 蚊虫13
• 1.2 猪脑13
• 1.3 病毒13
• 1.4 实验动物13
• 1.5 诱蚊灯13
• 1.6 主要试剂13
• 1.7 常用溶液13-15
• 1.8 主要仪器15
• 2. 实验方法15-26
• 2.1 蚊虫种群构成调查[25]15-18
• 2.2 猪脑样本采集18
• 2.3 RT-PCR检测病毒18-21
• 2.4 序列比对及系统进化分析21-23
• 2.5 乙脑病毒的分离23-24
• 2.6 蚊虫多样性分析24
• 2.7 基因分型与进化分析24-26
• 结果26-63
• 1.湖南怀化市蚊虫多样性分析26-32
• 1.1 蚊虫种类构成26-27
• 1.2 蚊虫多样性27-32
• 2. 湖南怀化市蚊虫和猪感染乙脑病毒的研究分析32-35
• 2.1 三带喙库蚊乙脑病毒自然感染的研究32-33
• 2.2 三带喙库蚊乙脑病毒地理分布的研究33-34
• 2.3 猪乙脑病毒自然感染的研究34-35
• 3. 湖南怀化蚊虫体内乙脑病毒序列测定与分子生物学鉴定35-47
• 3.1 新分离蚊虫体内湖南怀化株病毒的C/PrM和E基因序列测定和分析35-41
• 3.2 新分离蚊虫体内湖南怀化株病毒全基因组序列测定和分析41-47
• 4.猪源性乙型脑炎病毒分离株基因序列测定和分析47-63
• 4.1 猪源性乙型脑炎病毒分离株基因序列测定47
• 4.2 基因分型与进化分析47-50
• 4.3 新分离湖南怀化猪源性乙脑病毒株C/PrM核苷酸及氨基酸同源性分析50-53
• 4.4 新分离湖南怀化猪源性乙脑病毒株E基因的核苷酸及氨基酸差异位点分析53-59
• 4.5 新分离湖南怀化猪源性乙脑病毒株病毒基因比较分析59-63
• 讨论63-67
• 1. 湖南怀化市蚊虫多样性分析63-64
• 2. 湖南怀化市蚊虫和猪感染乙脑病毒情况与型别及流行株分析64
• 3. 湖南怀化市蚊虫和猪体内分离乙脑病毒E基因特征分析64-67
• 结论67-68
• 参考文献68-71
• 致谢71-72
• 个人简介72-73
• 附录73-85
• 1. 蚊虫体内湖南怀化株病毒全基因组序列73-80
• 2. 猪体内湖南怀化株病毒全基因组序列80-85

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 郭绶衡,李俊华;湖南省50年来流行性乙型脑炎流行病学分析[J];疾病控制杂志;2002年01期

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本文编号：271426