大肠杆菌O157的分子流行病学调查和毒力因子研究

发布时间：2017-06-05 03:24

  本文关键词：大肠杆菌O157的分子流行病学调查和毒力因子研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：大肠杆菌O157：H7是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型,是一种重要的食源性致病菌,人类感染后会引起轻度腹泻、出血性肠炎(HC)、溶血性尿毒综合症(HUS)和血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)等病症,严重时会导致死亡。自从1982年首次在美国发现该菌以来,国内外多个国家和省市都有过EHEC O157:H7流行和爆发,目前已成为世界公共卫生组织和食品安全组织关注的热点问题。为了更加清楚的了解上海及周边地区EHEC O157:H7的流行情况,也为了给本实验室在研究EHEC O157:H7方面建立平台,为今后的应用研究和致病机理研究奠定基础,本人在硕士期间做了如下研究： 1为了了解上海及周边地区EHEC O157的流行情况,2009.1-2011.12期间采集上海及周边地区猪场、牛场、鸡场的粪便样品以及菜市场和超级市场的肉类食品等,采用山梨醇麦康凯(SMAC)平板分离法和PCR鉴定其特异性基因rfbE的方法来分离和鉴定,同时结合血清凝集法和测序法进一步确定菌株的正确性；然后利用PCR扩增法对收集到的菌株进行毒力基因检测,利用结晶紫染色法测定它们形成生物被膜的能力,最后还运用多位点序列分析法(MLST)和随机引物多态性分析法(RAPD)对菌株进行分子分型,运用三重PCR法对其进行系统进化分群,分析它们的亲缘关系。 2010.7-2011.12期间分离到10株EHEC O157,综合本实验室前期收集并保存的菌株共22株,PCR法检测H7鞭毛基因fliC发现,其中有12株为EHEC O157:H7,而其余10株为EHEC O157:NM;22株菌株中四种毒力基因都含有的菌株有6株,含有其中三种毒力基因的菌株有2株,含有其中两种毒力基因的菌株有5株,只含其中一种毒力基因的菌株有7株,而不含毒力基因的菌株有2株；22株EHEC O157中只有EHEC26、EHEC27和EHEC40有较强的生物被膜形成能力；而EHEC001和EHEC028形成生物被膜能力中等；EHEC002、EHEC008和EHEC030仅有微弱的形成生物被膜能力；而其余14株菌都不能形成生物被膜。 22株EHEC0157经RAPD分型后分为五类,Ⅰ类菌株包括EHEC036、037、038、039、041和042,Ⅱ类菌株包括EHEC026、027、040和044,Ⅲ类菌株包括EHEC001、025、030、043和045,Ⅳ类菌株包括EHEC002、005、015、046和047,Ⅴ类菌株包括EHEC008和028；对22株EHEC0157进行系统进化分群发现,它们属于D群的菌株比较多,占59.1%,A、B2、B1群依次减少,分别占22.72%、13.64%和4.55%。22株EHECO157经过MLST法分型后,得到13个型别,以ST11、ST88和ST641这三个型别为主,其余型别菌株较少,本次研究中还发现了三株新的菌株,未在数据库中找到与之相同的型别。 2为进一步研究EHEC O157的更为简便的检测方法和应用,本文采用基因的原核克隆表达技术,将其特异性基因rfbE成功的克隆表达并纯化出该基因编码的蛋白。 3为了研究Z1965基因是否影响EHEC O157的毒力和功能,本文运用Red同源重组系统,成功的构建了EHEC O157:H7的Z1965基因缺失株,为进一步的研究工作奠定了坚实的基础。
【关键词】：大肠杆菌O157 分子流行病学调查 MLST rfbE Z1965
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R181.3
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-19
• 1.1 大肠杆菌O157：H7的主要毒力因子10-13
• 1.2 大肠杆菌O157：H7的检测方法研究现状13-14
• 1.3 大肠杆菌O157：H7分子分型方法研究现状14-16
• 1.4 RED同源重组系统的研究进展16-18
• 1.5 研究目的与意义18
• 1.6 研究内容和创新点18-19
• 第二章 肠出血性大肠杆菌O157菌株的分离鉴定19-24
• 引言19
• 2.1 材料和方法19-20
• 2.2 结果与分析20-22
• 2.3 讨论22-23
• 2.4 小结23-24
• 第三章 大肠杆菌0157分子流行病学调查24-37
• 引言24
• 3.1 材料和方法24-29
• 3.2 结果与分析29-34
• 3.3 讨论34-36
• 3.4 小结36-37
• 第四章 大肠杆菌O157的基因RFBE的克隆、表达及蛋白纯化37-43
• 引言37
• 4.1 材料和方法37-40
• 4.2 结果与分析40-42
• 4.3 讨论42
• 4.4 小结42-43
• 第五章 大肠杆菌O157的Z1965基因缺失株的构建43-47
• 引言43
• 5.1 材料与方法43-45
• 5.2 结果与分析45-46
• 5.3 讨论46
• 5.4 小结46-47
• 第六章 结论47-48
• 参考文献48-52
• 附录52-54
• 致谢54-55
• 作者简介55-56
• 附件56

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本文编号：422821