白藜芦醇对脂多糖攻击小鼠血管反应性的作用与机制

发布时间：2017-10-11 02:26

  本文关键词：白藜芦醇对脂多糖攻击小鼠血管反应性的作用与机制

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【摘要】：多种严重感染因素引起的内毒素休克(endotoxic shock,ES)、脓毒症(sepsis)或脓毒症休克(sepsis shock,SS)是临床常见的危重病理过程;大量研究表明,内毒素休克晚期出现了血管低反应性,是引起微循环障碍以及组织低灌注的重要因素。白藜芦醇(resveratrol,Res),具有多种生物活性;近年来的研究也发现,白藜芦醇对内毒素休克具有良好的干预作用,表现在减轻重要器官肺、肾、肝的结构损伤与功能障碍,多途径、多靶点地降低氧化应激与炎症反应,改善微循环灌注状态。但是,白藜芦醇对内毒素休克血管低反应性的作用如何,还未见报道。为此,本研究建立了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻击小鼠模型,应用微血管张力测定技术,观察白藜芦醇对其血管反应性的作用。首先,本文观察了白藜芦醇对腹腔注射LPS攻击小鼠的作用。24只BALC/c雄性小鼠随机均分为:假手术组(Sham)、Sham+Res、LPS、LPS+Res组,其中:LPS与LPS+Res组小鼠均腹腔注射LPS(35mg/kg,5 mg/ml),1 h后,LPS+Res组小鼠肌肉注射Res(30 mg/kg,300 mg/ml),LPS组小鼠仅注射等体积的溶媒——二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO);Sham与Sham+Res组首先腹腔注射等体积的生理盐水,1 h后,Sham+Res组小鼠肌肉注射等体积的Res,Sham组注射等体积的DMSO,记录存活时间。然后,54只BALC/c雄性小鼠随机均分为9组:正常对照组(Control)、Sham 6 h、Sham+Res6 h、LPS 6 h、LPS+Res 6 h、Sham 12 h、Sham+Res 12 h、LPS 12 h、LPS+Res 12 h组,Control组不给予任何处理因素,其它组处理因素同前述。在相应时间点的前1 h,小鼠腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉(70mg/kg,1%),行股部手术,剥离右股动脉,连接生物信号采集系统,记录MAP;行颈部手术,剥离右侧颈静脉,用注射器经颈静脉注射去甲肾上腺素(norepinephrine,NE,4.2μg/kg),记录NE注射后MAP的最大值,以注射前后MAP的差值(△MAP)评价小鼠的整体升压反应。另取24只小鼠,随机均分为:sham、sham+res、lps、lps+res组,按上述相同方法进行处理,于lps注射6h,麻醉状态下,留取小鼠肠系膜二级微动脉血管,制备离体微血管环,应用离体血管张力系统检测微血管对梯度ne收缩反应性的变化。结果显示,sham与sham+res组小鼠存活时间均超过24h,长期存活;lps+res组小鼠存活时间(17.59±2.24h)显著长于lps组(14.37±1.96h,p0.05)。sham6h、sham+res6h、sham12h、sham+res12h的map与△map均与control组无显著差异(p0.05);lps6h、lps+res6h组的map均显著低于、△map均显著高于control、sham6h、sham+res6h组(p0.05);lps12h、lps+res12h组的map均显著低于、△map均显著高于control、sham12h、sham+res12h组(p0.05);lps6h与lps+res6h、lps12h与lps+res12h组的map和△map均无显著差异(p0.05)。sham+res组小鼠微血管对梯度ne的反应性在ne浓度为1×10-7,3×10-7mol/l时显著高于sham组(p0.05);lps组小鼠微血管对梯度ne的反应性显著低于sham组(1×10-6,3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l,p0.05)、sham+res组(1×10-7,3×10-7,1×10-6,3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l,p0.05);lps+res组小鼠微血管对梯度ne的反应性曲线相对于lps组左移,在3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l时显著高于lps组(p0.05)。然后,本文观察了静脉注射lps后白藜芦醇的作用及机制。第一,取24只balb/c雄性小鼠随机均分为sham、sham+res、lps、lps+res组,其中:lps与lps+res组行颈部手术,经颈静脉注射lps(5mg/kg,5mg/ml),缝合伤口,1h后,lps+res组小鼠肌肉注射res(30mg/kg,300mg/ml),lps组小鼠仅注射等体积的dmso;sham与sham+res组经颈静脉注射等体积的生理盐水,1h后,sham+res组小鼠肌肉注射等体积的res,sham组注射等体积的dmso,记录存活时间。第二,取24只balb/c雄性小鼠随机均分为sham、sham+res、lps、lps+res组,腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉(70mg/kg,1%)后,行股部手术,剥离右股动脉,连接生物信号采集系统,记录map;然后按前述方法分别进行处理;在lps注射后6h,经颈静脉注射去甲肾上腺素(norepinephrine,ne,4.2μg/kg),按前述方法评价小鼠的整体升压反应。第三,取24只小鼠,随机均分为sham、sham+res、lps、lps+res组,按上述相同方法进行处理,到相应时间点时,留取小鼠肠系膜二级微动脉血管,制备离体微血管环,应用离体血管张力系统检测微血管对梯度ne收缩反应性的变化,应用rhoa、rock和mlcp的工具药分别观察了对sham、sham+res、lps、lps+res组微血管环反应的作用,探讨rhoa在白藜芦醇改善lps攻击小鼠血管反应性中的作用。结果发现,sham与sham+res组小鼠存活时间均超过24h,长期存活;lps+res组小鼠存活时间(20.45±2.81h)显著长于lps组(13.89±2.37h,p0.05)。sham与sham+res组的map与△map无显著差异(p0.05);lps、lps+res组的map均显著低于、△map均显著高于sham、sham+res组(p0.05),两组间的map与△map无显著差异(p0.05)。sham与sham+res组小鼠微血管对梯度ne的反应性除10-6mol/l外无显著差异(p0.05);lps组小鼠微血管对梯度ne的反应性显著低于sham组(3×10-5,10-5,3×10-6,10-6,3×10-7,10-7mol/l,p0.05)、sham+res组(3×10-5,10-5,3×10-6,10-6mol/l,p0.05);lps+res组小鼠微血管对梯度ne的反应性曲线相对于lps组左移,在3×10-5,10-5,3×10-6mol/l时显著高于lps组(p0.05)。同时,发现rhoa激动剂u-46619可提高sham与sham+res组、mlcp抑制剂oa提高sham组、rock抑制剂y-27632均降低sham与sham+res组微血管在多个ne浓度点的反应性(p0.05);u-46619提高了lps组微血管在多个ne浓度点的反应性,该作用被y-27632抑制(p0.05);oa对lps组微血管反应性无明显的作用,但联合y-27632能降低lps微血管的反应性(p0.05);y-27632均显著降低了lps+res组微血管在多个ne浓度点的反应性,该作用被u-46619所抑制(p0.05)。研究结果表明,在一定程度上,白藜芦醇均可抑制腹腔注射和静脉注射LPS攻击引起小鼠离体血管的低反应性,延长存活时间,但对小鼠的动脉血压水平、整体升压反应没有明显的改善作用;同时,LPS攻击小鼠后,整体升压反应与离体微血管反应性出现了不一致现象,可能与LPS发挥的拟交感作用有关,相关机制有待进一步研究;Res提高LPS静脉攻击小鼠血管反应性的作用与RhoA-ROCK-MLCP有关。
【关键词】：白藜芦醇 内毒素休克 升压反应 血管反应性 RhoA-ROCK-MLCP信号通路 小鼠
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 英文缩写14-15
• 前言15-16
• 材料与方法16-23
• 结果23-27
• 附图27-36
• 附表36-37
• 讨论37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 综述 白藜芦醇干预内毒素休克的作用与机制45-57
• 参考文献51-57
• 致谢57-59
• 个人简历59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 许书见;黄星星;朱瑞芳;余书勤;;白藜芦醇对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用[J];中国生化药物杂志;2009年06期

2 余应喜;范晶;张苜;;白藜芦醇对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及对巨噬细胞炎症蛋白-2、IL-10、IL-18表达的影响[J];中国生物制品学杂志;2012年08期

3 舒仕瑜;王兴勇;叶茂;王丽佳;李廷玉;;白藜芦醇苷上调Clara细胞分泌蛋白表达缓解大鼠内毒素休克性肺损伤[J];中国新药与临床杂志;2009年12期

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本文编号：1009989