水林佳对硫代乙酰胺所致的比格犬肝纤维化的保护作用及对Smad3信号通路的影响

发布时间：2017-10-12 07:22

  本文关键词：水林佳对硫代乙酰胺所致的比格犬肝纤维化的保护作用及对Smad3信号通路的影响

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【摘要】：研究背景:肝纤维化是由于内源和外源性的致病因素长期作用于肝脏导致的结果,如病毒、细菌及寄生虫感染;胆管阻塞;某些化学药物、毒物以及脂滴的沉积等,这些都可导致肝纤维化。活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)能够产生远超出处于稳定状态时的大量的细胞外基质(extracellular matrix,ECM),这是导致肝纤维化的最直接途径,其导致肝脏瘢痕形成,最终形成肝硬化甚至肝癌,危害人类健康。影响HSC活化的信号转导通路中与之关系最为密切的是Smad信号通路,而Smad3是该通路承上启下的关键分子,在HSC活化过程中起着重要作用。导师前期研究发现Smad3介导的信号通路在实验动物的大鼠肝纤维化形成过程中起重要作用;下调Smad3的表达,在肝组织中的ECM沉积量显著降低。目前研究认为抑制HSC的活化,能够逆转肝纤维化。水林佳是一种经典的肝损伤修复药物,它的主要成分是水飞蓟宾(silybin),该物质具有很强的清除氧自由基、减轻过氧化反应的作用,提高肝脏解毒能力,稳定、保护肝细胞膜,加快肝细胞修复、再生及具有抗肝纤维化的作用。但是水林佳对于肝纤维化的作用机制是否有Smad3信号通路参与的报道少见。为此本课题以硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)构建比格犬肝纤维化模型,再给予水林佳悬液灌胃治疗,探讨水林佳对肝纤维化的保护作用及是否通过Smad3信号通路发挥作用。目的:明确水林佳对TAA所致的比格犬肝纤维化是否具有保护作用,且该作用是否通过Smad3信号通路实现的。方法:健康、雄性比格犬18只,随机分成3组,每组6只。正常组:正常饲养12周。模型组:TAA皮下注射12mg/kg,2次/周,持续12周。TAA+水林佳组:TAA皮下注射12mg/kg,2次/周,持续12周,从第5周开始同时水林佳悬液灌胃每只28mg/kg/d。12周末,三组动物均静脉注射戊巴比妥钠麻醉后,取各只犬相同肝叶的肝组织用中性甲醛保存。选HE染色观察三组比格犬肝组织的病变程度;Masson染色观察比较三组的纤维胶原含量变化;选免疫组织化学染色方法用于观察比较三组比格犬肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原(Collagen I)及Smad3的表达和分布。结果:1.HE染色结果在正常组肝组织中可见有完整的肝小叶结构,肝细胞整齐有序的排列,细胞的大小均一,胞浆饱满。模型组的肝组织中则观察到肝小叶结构不清,肝索结构紊乱,呈不规则排列,肝细胞变性坏死,可见大量粗壮的胶原纤维延伸,周围充满大量的炎性细胞。TAA+水林佳组病变明显比模型组减轻,但仍比正常组严重。2.Masson染色结果模型组与正常组相比胶原纤维明显增粗变多,染色呈蓝色,伸入肝小叶中,胶原面积百分比明显增高(12.77±0.43 vs 0.30±0.02,P0.01);TAA+水林佳组中胶原纤维明显减少,胶原面积百分比低于模型组(4.68±0.22 vs 12.77±0.43,P0.01),但高于正常组(4.68±0.22 vs 0.30±0.02,P0.01),以上差异均具有统计学意义。3.肝脏组织免疫组织化学染色结果免疫组织化学染色结果判定:以图像中棕黄色、黄色染色部分为阳性表达。3.1α-SMA的表达:正常组仅在肝组织汇管区少量表达;模型组在汇管区及纤维条索处可见其表达增多,呈棕黄色;TAA+水林佳组表达减少,呈浅黄色,比正常组病变加重。3.2 Collagen I的表达:正常组仅表达在血管壁、胆管壁,呈浅黄的细丝状;模型组在汇管区、纤维条索等部位可见大量棕黄色的粗条状纤维;TAA+水林佳组阳性表达较模型组少,但比正常组表达增多。3.3 Smad3的表达:正常组中仅在肝窦及其周围的肝细胞胞浆中表达,呈浅黄色;模型组在汇管区、肝窦和肝细胞中有大量的棕黄色颗粒;TAA+水林佳组较模型组表达明显减少、染色减弱,但仍比正常组的染色部分增多。对以上图像做半定量分析,结果显示:模型组中的α-SMA、Collagen I及Smad3的表达量均明显高于正常组(15.93±1.59vs1.52±0.17;20.19±0.15 vs 0.41±0.02;6.69±0.23 vs 0.90±0.09,P0.01);在TAA+水林佳组中,以上指标的表达量均低于模型组(5.39±0.31 vs 15.93±1.59;5.04±0.09 vs 20.19±0.15;2.34±0.31 vs6.69±0.23,P0.01),但高于正常组(5.39±0.31 vs 1.52±0.17;5.04±0.09 vs0.41±0.02,P0.01;2.34±0.31 vs 0.90±0.09,P0.05),以上差异均具有统计学意义。结论:水林佳可以通过抑制HSC激活,减少Collagen I产生而改善TAA诱导的比格犬肝纤维化,且该作用可能与Smad3信号通路有关。
【关键词】：肝纤维化 水林佳 Smad3 比格犬
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常见缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-15
• 1 材料与方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 方法16-19
• 2 结果19-23
• 2.1 动物一般情况19
• 2.2 HE染色结果19
• 2.3 Masson染色结果19-21
• 2.4 组织免疫组织化学染色结果21-23
• 3 讨论23-26
• 4 结论26-27
• 5 创新之处27-28
• 6 存在的问题及今后研究方向28-29
• 参考文献29-32
• 综述32-43
• 参考文献39-43
• 致谢43-45
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果45-46
• 个人简介46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 潘勤;谢渭芬;张忠兵;;肝纤维化自发逆转的相关信号转导通路研究[J];中国现代医学杂志;2008年04期

2 Yun Zhang;Qian-Qian Zhang;Xiao-Hong Guo;Hai-Yan Zhang;Li-Xin Liu;;IGFBPrP1 induces liver fibrosis by inducing hepatic stellate cell activation and hepatocyte apoptosis via Smad2/3 signaling[J];World Journal of Gastroenterology;2014年21期

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本文编号：1017401